新城疫（Newcastle disease,ND）也稱為亞洲雞瘟或偽雞瘟,是由新城疫病毒（Newcastle disease Virus,NDV）引起的一種急性、熱性和高度接觸性禽傳染病。新城疫主要特征為呼吸困難、神經(jīng)癥狀及漿膜和黏膜出血。近年來,檢測NDV的方法不斷更新,但規(guī)�；B(yǎng)殖模式需要更靈敏或更快捷的檢測技術檢測NDV的早期感染,以便更好地防控NDV。傳統(tǒng)的NDV檢測方法主要包括病原的分離與培養(yǎng)鑒定、PCR（Polymerase chain reaction）、LAMP（Loop-mediated Isothermal Amplification）及 ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）等技術。這些檢測技術各有其優(yōu)缺點:病原學診斷方法為檢測NDV的金標準,但檢測時間長、成本高。PCR技術靈敏度高,但需要對樣品進行核酸提取,對實驗人員技術要求高,樣品易污染。LAMP是一種等溫擴增技術,但其擴增效率低,靈敏度與PCR相差甚遠,還沒有被廣泛認可。ELISA是用酶聯(lián)抗體與底物放大信號的技術,靈敏度較高,易于進行大批量樣本檢測,但由于其需要幾步... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１不同形狀的磁性納米顆粒／二氧化硅介孔材料納米復合材料２３??

?第一章Ｍ－ＭＳＮ納米探針的制備與表征???Ｍ－ＭＳＮ?ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ?ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ／ＰＥＩ?ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ／ＰＥＩ／Ａｂ－ＤＮＡ??ｂ＿待檢海病原?＿納米探針??Ｉ病原－抗?４?＃?（＇、鐮??孵育?—＜?孵宵??洗板＆?洗板??爭?：：：：：ｖ?ｆ?＾?＾??Ｙ?Ｙ?Ｙ?？?？?？?■?ｆ?ｆ?ｆ??￣洗板??加入ＴＭＢ洛液??ｖｔ?＾?＾?終止?５?－?顯色?４?＾??ｆ?ｆ?ｆ?Ｙ?＾?ｙ?ｉ?＾?＾?＾??黃色?藍色??圖２－１納米免疫探針設計原理圖（ａ）及其應用原理圖（ｂ）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｎａｎｏ－ｉｍｍｕｎｅ?ｐｒｏｂｅ?（ａ）?ａｎｄ?ｉｔｓ?ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｉｎ?ＥＬＩＳＡ?（ｂ）??１、實驗材料與設備儀器??ｉ．ｉ主要試劑和耗材??表２－１主要試劑和耗材??Ｔａｂｌｅ?２－１?Ｍａｉｎ?ｒｅａｇｅｎｔｓ?ａｎｄ?ｃｏｎｓｕｍａｂｌｅｓ??試劑名稱?購買公司???磁性介孔二氧化硅納米顆粒?上海羧菲生物醫(yī)藥科技有限公司??過氧化物酶?北京索萊寶科技有限公司??聚乙烯亞胺?賽默飛世爾科技公司??新城疫單克隆抗體?北京博奧森生物技術有限公司??單鏈ＤＮＡ?北京全式金生物公司??疊氮化合物?西安瑞禧生物科技有限公司??鹽酸胍?合肥白鯊生物科技有限公司???１０??

ＥＩ的量。??２＿３．４?ＰＥＩ／ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ?的?ＴＥＭ?表征方法??由于原本的Ｍ－ＭＳＮ為帶有空隙的介孔材質，而包裹了?ＰＥＩ的ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ??納米顆粒會由于ＰＥＩ的包封原因，將Ｍ－ＭＳＮ原本的孔隙封鎖，在電鏡下會看到??無介孔狀態(tài)的納米粒子，將準備好的樣品（Ｍ－ＭＳＮ、ＰＯＤ／Ｍ－ＭＳＮ／ＰＥＩ）制樣后??于電鏡下觀察，具體制樣過程同第一章２．１．１。??２．４抗體（Ａｂ）與單鏈核酸（ｓｓＤＮＡ）的合成方法??Ｙ??Ａｎｔｉ－ＮＤＶ?Ａｂ??Ｎ３??廣丨??圖２－２抗體鏈接ｓｓＤＮＡ的原理示意圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｌｉｎｋｅｄ?ｓｓＤＮＡ??抗體的本質為蛋白質，蛋白質上有許多的氨基與羧基。利用抗體分子表面的??化學基團進行ｓｓＤＮＡ的連結己經(jīng)非常常見。疊氮化合物（Ａｚｉｄｏ－ｄＰＥＧ４－ＮＨＳ?ｅｓｔｅｒ）??是一種水脂雙溶性的交聯(lián)試劑，其一端為ＮＨＳ酯基團，可通過形成酰胺鍵與交??聯(lián)分子的氨基反應；另一端為疊氮官能團，常見于點擊化學反應中，其通過銅離??子催化的環(huán)化加成反應與炔烴進行偶聯(lián)。本實驗通過抗體分子上氨基與疊氮化合??物結合而后疊氮化合物與ＤＮＡ分子上炔基結合的兩步交聯(lián)反應以生成抗體核酸??偶聯(lián)物。??１８??

【參考文獻】：
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