本研究旨在獲得具有天然構(gòu)象和活性良好的禽呼腸孤病毒（ARV）σB和σC蛋白,采用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在昆蟲(chóng)細(xì)胞中共表達(dá)σB和σC蛋白,并對(duì)其活性進(jìn)行鑒定。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中ARVσB和σC基因序列設(shè)計(jì)引物,將兩個(gè)基因克隆至pFast-Dual載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞,篩選獲得重組穿梭桿粒。通過(guò)轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞,篩選到含有σB和σC基因的重組病毒。將重組病毒感染sf9細(xì)胞,通過(guò)優(yōu)化接毒量和收獲時(shí)間等參數(shù),確定最佳表達(dá)條件,在sf9細(xì)胞中高效共表達(dá)σB和σC蛋白。Western blotting和間接免疫熒光（IFA）檢測(cè)結(jié)果表明,成功在sf9細(xì)胞中共表達(dá)了ARVσB和σC蛋白,并具有很好的生物學(xué)活性。本試驗(yàn)結(jié)果為開(kāi)發(fā)鑒別診斷試劑以及ARV顆粒疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2020,47(05)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

ARV σB和σC基因序列擴(kuò)增結(jié)果

重組質(zhì)粒酶切結(jié)果

重組桿粒Bacmid-σB-σC PCR鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]禽呼腸孤病毒感染流行病學(xué)調(diào)查與廣西地方分離株S1基因的測(cè)序和克隆[D]. 李斌.廣西大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3533750