豬胰腺脂肪酶（PPL）是一種由449個氨基酸組成的單鏈球蛋白,分子大小在50-52kDa。豬胰腺脂肪酶作為一種內源性的脂肪酶,能高效的將甘油三酯水解并釋放脂肪酸。在動物機體內,飼糧中脂肪的消化吸收主要依賴于胰腺酶類。脂肪的消化對動物特別對能量要求極高的仔豬具有重要意義,因為仔豬從飼糧中獲得的能量有時不能滿足自身的需求,需要動用機體沉積的脂肪來滿足能量需求。在仔豬斷奶期間,胰腺消化酶的激活、分泌和功能尚未發(fā)育完善,特別是一些主要分解類的酶如脂肪酶。在幼齡階段尤其是斷奶期間,PPL分泌不足會導致仔豬應激,造成生長停頓或遲緩,造成重大的經濟損失。商品的豬胰腺脂肪酶常用于幫助患有胰腺功能紊亂和營養(yǎng)不良的病人,幫助病人消化。但是商品豬胰腺脂肪酶主要來源于動物胰腺提取,在提取過程中會有一些其他酶類的污染。在生產過程中酶蛋白的提取和純化的高成本、豬胰腺組織資源有限、潛在的微生物疾病污染等因素限制了豬胰腺脂肪酶在飼料工業(yè)中的大規(guī)模生產應用。因此,有必要開發(fā)一種利用基因工程重組技術在酵母表達系統(tǒng)中高效、安全表達具有天然生物學活性豬胰腺脂肪酶的方法。本研究的目的是通過對豬胰腺脂肪酶（PPL）部分基因進行密... 

【文章來源】：四川農業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數】：63 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮寫詞表
前言
1 文獻綜述
    1.1 脂肪酶研究概況
        1.1.1 脂肪酶的來源與分布
        1.1.2 脂肪酶的結構和生物學特點
        1.1.3 脂肪酶的研究進展
        1.1.4 脂肪酶在生產中的應用
    1.2 胰腺脂肪酶研究進展
        1.2.1 胰腺脂肪酶的結構
        1.2.2 胰腺脂肪酶的功能
        1.2.3 影響胰腺脂肪酶活性的因素
    1.3 巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)研究概況
        1.3.1 巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)宿主菌
        1.3.2 畢赤酵母的表達載體
        1.3.3 外源基因在畢赤酵母中的表達
        1.3.4 巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)的優(yōu)化
2 本研究的意義、研究目標以及技術路線
    2.1 本研究的意義
    2.2 本研究的研究目標
    2.3 本研究技術路線
3 材料與方法
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 菌株及試劑
        3.1.2 試驗主要儀器設備
        3.1.3 試驗培養(yǎng)基
        3.1.4 相關溶液的配置
        3.1.5 引物設計
    3.2 實驗方法
        3.2.1 PPL的改造
        3.2.2 表達載體pPICZaA-rePPL的構建
        3.2.3 pPICZaA-rePPL在畢赤酵母中的表達與純化
        3.2.4 對轉化子進行Real-Time PCR篩選
        3.2.5 用甲醇誘導重組rePPL的表達及純化
        3.2.6 重組rePPL的分子量及濃度測定
        3.2.7 rePPL活性檢測
        3.2.8 酶的最適反應溫度
        3.2.9 酶的最適pH
        3.2.10 酶的熱穩(wěn)定性
        3.2.11 酶的Km值和Vmax的測定
        3.2.12 金屬離子對酶活力的影響
4 實驗結果與分析
    4.1 PPL基因的改造
    4.2 重組表達載體pPICZaA-rePPL的構建
    4.3 畢赤酵母中的pPICZaA-rePPL表達菌體的轉化與篩選
    4.4 rePPL在巴斯德畢赤酵母中的表達以及純化
    4.5 純化重組蛋白的濃度測定
    4.6 重組脂肪酶的酶學性質分析
5 討論
    5.1 脂肪酶在畢赤酵母中的表達
    5.2 有關脂肪酶活力的測定
    5.3 有關脂肪酶的酶學性質
6 結論與展望
    6.1 研究結論
    6.2 展望
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[4]脂肪酶及其在飼料工業(yè)中的應用研究[J]. 楊滔,桂濤,李春梅,王有芳.  飼料工業(yè). 2011(S1)
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博士論文
[1]洋蔥伯克霍爾德菌的篩選、鑒定及其脂肪酶基因的高效表達[D]. 賈彬.華中科技大學 2010
[2]黑曲霉脂肪酶的酶學性質、基因克隆與表達及結構預測[D]. 舒正玉.華中科技大學 2007
[3]熒光假單孢菌脂肪酶基因的克隆、改造及其在畢赤酵母中的表達[D]. 王海燕.中國農業(yè)科學院 2006

碩士論文
[1]脂肪酶等在造紙過程中的應用及機理研究[D]. 王洪振.山東輕工業(yè)學院 2011
[2]豬胰腺脂肪酶基因克隆、畢赤酵母表達及其酶活性檢測[D]. 謝小莉.四川農業(yè)大學 2011
[3]來源于Selenomonas ruminantium的植酸酶基因的改造及在畢赤酵母中的高效表達[D]. 都占魁.中國農業(yè)科學院 2002



本文編號：3530785