應(yīng)用PCR方法擴(kuò)增了豬偽狂犬病病毒（PRV）NY株TK基因兩側(cè)序列,克隆至pUC-19載體,同時(shí)插入綠色熒光蛋白標(biāo)記基因,構(gòu)建轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pUC-TKLRE,并與PRV變異株gE/gI雙基因缺失突變株rPRV NY-gE^-/gI^-的基因組DNA共轉(zhuǎn)染ST細(xì)胞,通過(guò)蝕斑純化,獲得表達(dá)熒光蛋白的PRV三基因缺失突變株。分別用PRV三基因缺失突變株、rPRV NY-gE^-/gI^-、PRV商品活疫苗Bartha-K61株、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液免疫6周齡雌性小鼠,2周后對(duì)小鼠進(jìn)行第2次免疫,且首免后6周用PRV強(qiáng)毒NY株對(duì)小鼠進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。結(jié)果顯示,成功拯救PRV三基因缺失突變株rPRV NY-gE^-/gI^-/TK^--EGFP⁺,且對(duì)小鼠是安全的。間接ELISA試驗(yàn)和病毒中和試驗(yàn)證實(shí)rPRV NY-gE^-/gI^-/TK^--EGFP⁺使小鼠機(jī)體... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,40(10)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

PRV三基因缺失株rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+的構(gòu)建示意圖

應(yīng)用間接ELISA檢測(cè)方法對(duì)每周采集的各組小鼠血清進(jìn)行PRV抗體檢測(cè),所測(cè)得的數(shù)據(jù)使用GraphPad Prism 6.0繪制成折線圖并計(jì)算P值,結(jié)果如圖2所示,第1次免疫7 d后Bartha-K61(B組)和rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+(C組)已有效地刺激小鼠產(chǎn)生了抗PRV的抗體(P<0.001);之后Bartha-K61免疫組(B組)和rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+免疫組(C組)抗體水平均保持穩(wěn)定升高,在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+免疫組(C組)抗體水平略高于Bartha-K61免疫組(B組),但兩組抗體水平差異并不顯著(P>0.05)。DMEM免疫組并未刺激小鼠產(chǎn)生PRV抗體。2.5 血清中和試驗(yàn)檢測(cè)PRV抗體結(jié)果

通過(guò)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群的分布情況,所測(cè)得的數(shù)據(jù)使用GraphPad Prism 6.0繪制成柱狀圖并計(jì)算P值。由圖3可見(jiàn),與DMEM免疫的對(duì)照組(A組)相比,Bartha-K61(B組)和rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+(C組)免疫的試驗(yàn)組小鼠的外周血T淋巴細(xì)胞亞類CD3+、CD4+和CD8+的數(shù)量較多,且rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+(C組)免疫組的T淋巴細(xì)胞亞類CD3+、CD4+和CD8+的數(shù)量最多。2.7 攻毒保護(hù)試驗(yàn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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