狂犬病是由狂犬病病毒引起的一種死亡率達(dá)100%的神經(jīng)性傳染病,人和所有溫血?jiǎng)游锒家赘�。該病呈世界性分�?主要發(fā)生在亞、非、歐和美洲的未發(fā)達(dá)國(guó)家,中國(guó)、印度等最為嚴(yán)重。WHO公布的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,145個(gè)國(guó)家中有100個(gè)國(guó)家報(bào)導(dǎo)有狂犬病疫情,全球每年有6萬(wàn)人死于狂犬病,嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康。造成本病流行的主要原因是人們預(yù)防該病的意識(shí)不到位,家養(yǎng)動(dòng)物的免疫密度低,暴露后未能及時(shí)進(jìn)行免疫治療。本研究以日本構(gòu)建的狂犬病病毒株rRC-HL cDNA克隆為基礎(chǔ),用反向遺傳技術(shù)將廣西流行狂犬病病毒GX01株的M基因替換到rRC-HL cDNA克隆,構(gòu)建出含有GX01毒株M基因的RC-HL（GX01M）感染性cDNA克隆,并在BSR細(xì)胞成功拯救出突變體重組病毒rRC-HL（GXO1M）。通過(guò)測(cè)定突變體重組病毒RC-HL（GXO1M）與親本病毒rRC-HL的生物學(xué)特性,發(fā)現(xiàn)突變體重組病毒RC-HL（GXO1M）的病毒滴度比親本病毒rRC-HL低,RNA轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)水平以及在細(xì)胞間的傳播能力也比親本病毒rRC-HL低。為進(jìn)一步研究GX01株M基因的功能區(qū)域,將GX01病毒的M基因推定的氨基酸序列與RC-... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：121 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１狂犬病嵌合病毒的基因組結(jié)構(gòu)示意圖??Ｆｉ．?２－１?Ｇｅｎｏｍｉｃ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ｃｈｉｍｅｒｉｃ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?Ｒａｂｉｅｓ?ｖｉｒｕｓ??

毒的拯救結(jié)果，免疫熒光結(jié)果顯示在ＮＡ細(xì)胞中都可以見(jiàn)到清晰的病毒熒光灶，說(shuō)明病??毒拯救成功，其中病毒ｒＲＣ－ＨＬ的熒光灶面積和熒光強(qiáng)度都比病毒ｒＲＣ－ＨＬ?（ＧＸ０１Ｍ）??的強(qiáng)（圖２－３）。拯救的ｒＲＣ－ＨＬ和ｒＲＣ－ＨＬ（ＧＸＯｌＭ）病毒提取病毒的核酸，用ＲＭ１／ＲＣＭ２??弓丨物做ＲＴ－ＰＣＲ，克隆到ＰＭＤ１８－Ｔ載體并測(cè)序，測(cè)序結(jié)果表明拯救出來(lái)的病毒序列與預(yù)??期符合。??Ａ?Ｂ??ｃ??圖２－３間接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)感染ＮＡ細(xì)胞的拯救病毒??Ａ：狂犬病病毒ｒＲＣ－ＨＬ?Ｂ：狂犬病病毒ｒＲＣ－ＨＬ?（ＧＸ０１Ｍ）?Ｃ：正常ＮＡ細(xì)胞??Ｆｉｇ．?２－３?ＩＦＡ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｒｅｓｃｕｅｄ?ＲＶｓ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ＮＡ?ｃｅｌｌｓ??Ａ：?Ｒｅｓｃｕｅ?ｏｆ?ｒａｂｉｅｓ?ｒＲＣ－ＨＬ?ｓｔｒａｉｎ?Ｂ：?Ｒｅｓｃｕｅ?ｏｆ?ｒＲＣ－ＨＬ?（ＧＸ０１Ｍ）?ｓｔｒａｉｎ?Ｃ：?Ｍｏ

ｒＲＣ－ＨＬ（ＧＸＯｌＭ）病毒的在?２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ?和?９６ｈ?毒價(jià)分別為?３Ｘ１０４、９．７Ｘ１０５、５Ｘ??１０６和８．３Ｘ１０６?ｆｆｂ／ｍｌ。ＧＸ０１病毒的毒價(jià)在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)都比較低，分別為８Ｘ１０２、３．７??Ｘ１０３、８．３Ｘ１０３和１．３Ｘｌ〇４ｆｆｉｉ／ｍｌ?（圖２－５?Ａ）。病毒的一步生長(zhǎng)曲線和多步生長(zhǎng)曲線相??似，ｒＲＣ－ＨＬ?（ＧＸ０１Ｍ）的毒價(jià)介于ｒＲＣ－ＨＬ和ＧＸ０１之間，感染后４８小時(shí)，??ｒＲＣ－ＨＬ（ＧＸＯｌＭ）病毒毒價(jià)比ｒＲＣ－ＨＬ毒價(jià)降低了?８３倍，但比ＧＸ０１病毒毒價(jià)增高了?６００??倍（圖２－５?Ｂ）。結(jié)果表明，替換了?ＧＸ０１株的Ｍ基因后，影響了病毒的增殖速度，重??組病毒ｒＲＣ－ＨＬ?（ＧＸ０１Ｍ）比親本病毒ｒＲＣ－ＨＬ的病毒生長(zhǎng)曲線明顯降低。??Ａ??ｍ．ｏ．ｉ．?＝?０．０１??＿?１０－．??｜?８－?＊???ｒＲＣ－ＨＬ??Ｈ：?ｒＲＣ－ＨＬ（ＧＸＯＩＭ）??｜?６－??＂’?ＧＸ０１??ｒ?４?????￡?＾???２?２＇??０?２０?４０?６０?８０?１００??Ｈｏｕｒ?ｐｏｓｔ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??Ｂ??ｍ．ｏ．ｉ．?＝?５??＿＿＿?１０－，??｜?８－????＂?－ｍ－?ｒＲＣ－ＨＬ??＼ｔ??ａ?＋?ｒＲＣ－ＨＬ（ＧＸＯＩＭ）??１?６＇?一一?ＧＸ０１??ｆ４－?＿．??—??２?２＇??０?１０?２０?３０?４０?５０??Ｈｏｕｒ?ｐｏｓｔ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ??圖２－５狂犬


本文編號(hào)：3529091