CD40（cluster of differention 40）是腫瘤壞死因子受體超家族成員之一,屬于I型跨膜糖蛋白,主要表達(dá)在上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、造血細(xì)胞、一些腫瘤細(xì)胞以及免疫細(xì)胞表面。免疫細(xì)胞表面的CD40與活化的T細(xì)胞產(chǎn)生的CD40L結(jié)合,可促進(jìn)樹突狀細(xì)胞（Dendritic cells,DCs）增殖、分化和成熟,增強(qiáng)其抗原提呈能力和吞噬凋亡細(xì)胞的能力;也可作為B細(xì)胞活化的第二信號(hào),參與了B細(xì)胞的活化、增殖和分化過(guò)程,促進(jìn)抗體的產(chǎn)生和類型轉(zhuǎn)換,并能使即將凋亡的B細(xì)胞存活并增殖,形成生發(fā)中心;還可明顯上調(diào)APC細(xì)胞表達(dá)CD80和CD86分子,來(lái)作為T細(xì)胞活化的第二信號(hào),能有效刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)。一直以來(lái),缺乏有效的早期受孕檢測(cè)手段是制約奶牛行業(yè)發(fā)展的一大問(wèn)題,可導(dǎo)致奶�？諔哑陂L(zhǎng)、繁殖率低以及成本提高等問(wèn)題。奶牛早孕因子（EPF）是最早被確認(rèn)為妊娠期的生化標(biāo)志之一,故EPF的有無(wú)可作為早期是否受孕的可靠指標(biāo)。本課題前期根據(jù)EPF表位序列設(shè)計(jì)合成了由14個(gè)氨基酸組成的B細(xì)胞表位肽,該B細(xì)胞表位肽屬于小分子半抗原。由于小分子免疫原性弱,免疫過(guò)程需偶聯(lián)到大的載體蛋白上,且常用的弗... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

CD40蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)

第二篇研究?jī)?nèi)容第1章小鼠CD40胞外段的抗原性分析、原核表達(dá)及純化25暴露的幾率不大，不易形成B細(xì)胞抗原表位，親水區(qū)一般暴露在外面的幾率較大，形成B細(xì)胞抗原表位的概率也較大[106]。K-D法預(yù)測(cè)的蛋白親水性區(qū)域主要位于5～106、118～122、135～163、170～173位氨基酸殘基（見圖1.2）。通過(guò)對(duì)以上蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)分析，B細(xì)胞抗原表位主要位于β轉(zhuǎn)角、無(wú)規(guī)則卷曲、表面可及性高的區(qū)域、蛋白親水區(qū)和抗原性區(qū)域，約有6個(gè)抗原表位位點(diǎn)，即5～29、32~49、50～101、114～130、136～163、168～173位氨基酸殘基處，分段較多、較分散，且占胞外段全序列的83.2%，抗原性較強(qiáng)，因此小鼠CD40胞外段可作為制備抗體良好的免疫原。本實(shí)驗(yàn)選取小鼠CD40胞外段全長(zhǎng)共173個(gè)氨基酸所對(duì)應(yīng)序列進(jìn)行原核表達(dá)。圖1.2CD40蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)分析Fig.1.2SecondarystructureanalysisofCD40protein1.3.3CD40基因胞外段的擴(kuò)增在1.3.2中預(yù)測(cè)的抗原表位區(qū)氨基酸個(gè)數(shù)占胞外段CDS區(qū)總數(shù)的83.2%，分段多，較分散，用link連接表達(dá)效果不如直接取全長(zhǎng)表達(dá)，且胞外段全長(zhǎng)免疫原性較強(qiáng)。故提取小鼠脾臟總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA作為模板，用針對(duì)胞外全長(zhǎng)的CDS區(qū)設(shè)計(jì)合成的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果顯示在522bp處有明亮的條帶（見圖1.3），與理論大小相符。PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果(見圖1.4)與Genbank比對(duì)完全一致。

第二篇研究?jī)?nèi)容第1章小鼠CD40胞外段的抗原性分析、原核表達(dá)及純化26圖1.3CD40目的基因PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.1.3PCRamplificationresultofCD40targetgeneM：DL2000DNAMarker；1、2：CD40目的基因片段圖1.4PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果Fig.1.4PCRproductsequencingresult

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3518697