副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis, Hps）屬于巴氏桿菌科嗜血桿菌屬,是豬上呼吸道的常在菌,該菌引起的感染給養(yǎng)豬生產帶來極大的損失。該菌血清型眾多,毒力因子復雜,到目前為止發(fā)現(xiàn)了一些副豬嗜血桿菌的毒力因子,但針對不同致病力副豬嗜血桿菌分泌蛋白的差異研究報道甚少。本試驗選取兩株不同致病力副豬嗜血桿菌Nagasaki和SW114菌株作為研究對象,比較其生長特性及致病力,采用蛋白質組學技術比較并鑒定其對數(shù)期差異分泌蛋白質,同時利用熒光定量PCR技術分析差異分泌蛋白基因轉錄水平,具體研究內容如下：1副豬嗜血桿菌Nagasaki和SW114株生長特性和致病力的比較本試驗采用比濁法和平板活菌計數(shù)兩種方法測量了Nagasaki和SW114株的生長曲線,結果得知對數(shù)期SW114株生長速度明顯快于Nagasaki株,SW114株穩(wěn)定期持續(xù)時間約為9h,長于Nagasaki株的6h,當OD600=0.6時,兩菌株都處于對數(shù)生長期。以體重20-22g 4-8周齡雌性BALB/c小鼠為試驗動物,采用改進寇氏法鋇Nagasaki和SW114株的半數(shù)致死量,結果Nagasaki株的半數(shù)致死量... 

【文章來源】：四川農業(yè)大學四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一部分 文獻綜述
    1 副豬嗜血桿菌
        1.1 副豬嗜血桿菌及其血清分型
        1.2 副豬嗜血桿菌致病機制
        1.3 副豬嗜血桿菌的毒力因子
            1.3.1 6-P-葡萄糖酸脫氫酶
            1.3.2 脂寡糖
            1.3.3 細胞膨脹致死毒素
            1.3.4 免疫球蛋白A蛋白酶
            1.3.5 莢膜
            1.3.6 菌毛
            1.3.7 孔蛋白家族蛋白
            1.3.8 V型蛋白分泌系統(tǒng)
            1.3.9 單體自轉運蛋白
            1.3.10 毒力相關的三聚體自轉運蛋白
        1.4 副豬嗜血桿菌毒力因子鑒定途徑
            1.4.1 通過構建缺失突變株鑒別副豬嗜血毒力因子
            1.4.2 通過不同毒力菌株的比較或者特定培養(yǎng)條件下的比較鑒定毒力因子
    2 蛋白質組學概述
        2.1 蛋白質組學的產生及其研究內容
        2.2 蛋白質組學技術路線
            2.2.1 雙向凝膠電泳
            2.2.2 質譜技術
            2.2.3 蛋白質組生物信息學
        2.3 蛋白質組學技術在細菌蛋白篩選方面的應用
            2.3.1 篩選疫苗候選蛋白及發(fā)現(xiàn)新蛋白
            2.3.2 篩選病原菌毒力蛋白
            2.3.3 篩選耐藥機制相關蛋白
    3 細菌分泌蛋白組研究進展
    4 研究目的及意義
第二部分 實驗研究
    第一章 副豬嗜血桿菌Nagasaki和SW114株生長特性及致病力比較
        1 試驗材料
            1.1 試驗菌株
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 實驗動物
        2 試驗方法
            2.1 Nagasaki和SW114株生長曲線測量
                2.1.1 菌液OD_(600)的測定
                2.1.2 平板活菌計數(shù)
            2.2 Nagasaki和SW114株致病力比較
                2.2.1 預試驗
                2.2.2 正式試驗
                2.2.3 半數(shù)致死量的計算
        3 試驗結果
            3.1 Nagasaki和SW114株生長曲線
            3.2 預試驗結果
            3.3 Nagasaki和SW114株的致病力比較
        4 討論
        5 小結
    第二章 副豬嗜血桿菌Nagasaki和SW114株分泌蛋白的差異分析
        1 試驗材料
            1.1 試驗菌株
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗方法
            2.1 分泌蛋白樣品的制備
            2.2 分泌蛋白樣品濃度測定
                2.2.1 分泌蛋白樣品的溶解
                2.2.2 Bradford法定量
            2.3 等點聚焦
                2.3.1 膠條的準備
                2.3.2 上樣
                2.3.3 放置膠條
                2.3.4 加礦物油
                2.3.5 設置程序
            2.4 膠條的平衡、轉移及SDS-PAGE
                2.4.1 膠條的平衡
                2.4.2 膠條的轉移
                2.4.3 SDS-PAGE
            2.5 考馬氏亮藍G250染色與脫色
            2.6 雙向電泳凝膠圖像掃描
            2.7 圖譜分析及差異蛋白篩選
            2.8 差異蛋白質譜鑒定及數(shù)據(jù)庫搜索
                2.8.1 質譜鑒定
                2.8.2 數(shù)據(jù)庫搜索
        3 結果
            3.1 蛋白定量結果
            3.2 組內一致性分析
            3.3 雙向電泳凝膠圖像的掃描及差異蛋白點的篩選
            3.4 差異蛋白的質譜鑒定
        4 討論
            4.1 關于雙向電泳圖譜的構建
            4.2 關于凝膠圖像的分析
            4.3 關于篩選的差異蛋白
        5 小結
    第三章 副豬嗜血桿菌差異分泌蛋白轉錄水平的研究
        1 試驗材料
            1.1 試驗菌株
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 試驗方法
            2.1 副豬嗜血桿菌SW114和Nagasaki株總RNA的抽提
            2.2 cDNA的合成
            2.3 引物合成
            2.4 熒光定量PCR檢測
                2.4.1 標準曲線的繪制
                2.4.2 擴增曲線的建立
                2.4.3 相對轉錄水平的計算
        3 結果
            3.1 抽提RNA濃度測定及純度鑒定
            3.2 擴增效率的建立
            3.3 16sRNA、AidA、ompD15和AfuA擴增曲線
            3.4 16sRNA、AidA、ompD15和AfuA熔解曲線的建立
            3.5 相對轉錄水平差異分析
        4 討論
        5 小結
結論
參考文獻
致謝
讀研期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]副豬嗜血桿菌的分離鑒定及蜂膠疫苗的免疫保護效力研究[D]. 鐘霏.四川農業(yè)大學 2012
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[5]柔嫩艾美耳球蟲菱形蛋白樣蛋白酶（EtROMs）基因的克隆及不同發(fā)育階段轉錄水平研究[D]. 王洪成.南京農業(yè)大學 2010
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本文編號：3516131