狂犬�。≧abies）是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）引起的一種具有極高致死性的人獸共患傳染病,能夠感染人和溫血動物。全球每年因該病死亡的人數(shù)在60000人左右。目前該病尚無有效的治療方法,感染人一旦出現(xiàn)癥狀,病死率100%。但只要進行有效的暴露后處置,就可100%預防本病的發(fā)生。由于犬是本病的重要貯存和傳播宿主,針對犬進行免疫可有效預防本病的發(fā)生,防止其向人群的傳播。業(yè)已證明,70%的犬只免疫覆蓋率即可有效阻止狂犬病的傳播。評價免疫效果及免疫覆蓋率的指標是機體內(nèi)RABV中和抗體的水平。目前針對狂犬病中和抗體測定的方法有多種,國際上認可的金標準方法包括動物體內(nèi)中和試驗和細胞中和試驗。由于動物中和試驗常采用較多動物,花費周期較長,目前已不多用。細胞中和試驗方法有熒光抗體病毒中和試驗（Fluorescent antibody virus neutralization,FAVN）和快速熒光灶抑制試驗（Rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT）兩種。但這兩種方法通常需要在2³個工作日才能完成,并涉及活毒... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學院北京市

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pCMV-Ge的酶切鑒定Fig.1-1RestrictionenzymedigestionofrecombinantplasmidpCMV-Ge

0、400、500、600、700、800μg/ml）后，在 1-3 天時，高濃出現(xiàn)明顯的生長減慢現(xiàn)象，在 4-5 天后細胞開始皺縮，破 天時，600μg/ml以及更高濃度的各孔細胞全部死亡，鏡下3 細胞；而不加壓孔細胞鋪滿底壁。即 600μg/ml的 zeocin的生長。為更精確的篩選到陽性克隆，筆者最終選取略高g/ml作為轉(zhuǎn)染后篩選陽性克隆的最佳藥物濃度；在完成陽用 600μg/ml的藥物濃度維持陽性細胞系在加壓條件下的的篩選后的細胞與正常細胞混合鋪板并施加以 zeocin藥物壓力后到部分存活下來并有分裂能力的疑似陽性細胞，到第 20依靠自身不斷分裂聚成一小塊細胞集合，鏡下觀察如圖 此類細胞克隆，不斷維持其生長傳代后，收集表達產(chǎn)物作A B

圖 1-3 表達產(chǎn)物的 ELISA 檢測1-3 Detection of the reactivity of expression products using 物的 Western Blot 檢測 ELISA 方法檢測到部分能夠同時與抗 his 標簽單抗與抗 應的細胞株后，選取細胞株 3 的表達上清，進行 Wester白的大小。反應結(jié)果如圖 1-4，兩抗體的 WB 結(jié)果均顯示了特異性條帶，與預期相符，證明 RABV 糖蛋白膜外區(qū)樣品名稱M 1 2M 1 2 3A B

【參考文獻】：
期刊論文
[1]狂犬病病毒不同毒株糖蛋白免疫原性的比較研究[J]. 陳騰,張錦霞,張靜遠,陳奇,張菲,米麗娟,張守峰,扈榮良.  中國獸醫(yī)科學. 2016(04)
[2]狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外區(qū)的原核表達及純化[J]. 鞠美芳,殷相平,柳紀省.  生物技術(shù)通報. 2012(09)
[3]狂犬病病毒N蛋白主要抗原區(qū)的表達及SPA-ELISA抗體檢測方法的建立[J]. 曾妮,宮苗苗,郭李平,邱文英,李剛.  生物工程學報. 2011(08)
[4]狂犬病病毒糖蛋白膜外區(qū)基因在大腸埃希氏菌中的高效表達[J]. 蔡月琴,葉菊秀,李玲燕,周繼勇.  中國獸醫(yī)科學. 2006(06)

碩士論文
[1]兩株狂犬病病毒糖蛋白的桿狀病毒表達及其免疫原性研究[D]. 陳奇.中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院 2013



本文編號：3514848