基于RABV糖蛋白膜外區(qū)的阻斷ELISA抗體檢測(cè)方法建立及應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間：2021-11-23 23:41
狂犬�。≧abies）是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）引起的一種具有極高致死性的人獸共患傳染病,能夠感染人和溫血?jiǎng)游铩Ｈ蛎磕暌蛟摬∷劳龅娜藬?shù)在60000人左右。目前該病尚無(wú)有效的治療方法,感染人一旦出現(xiàn)癥狀,病死率100%。但只要進(jìn)行有效的暴露后處置,就可100%預(yù)防本病的發(fā)生。由于犬是本病的重要貯存和傳播宿主,針對(duì)犬進(jìn)行免疫可有效預(yù)防本病的發(fā)生,防止其向人群的傳播。業(yè)已證明,70%的犬只免疫覆蓋率即可有效阻止狂犬病的傳播。評(píng)價(jià)免疫效果及免疫覆蓋率的指標(biāo)是機(jī)體內(nèi)RABV中和抗體的水平。目前針對(duì)狂犬病中和抗體測(cè)定的方法有多種,國(guó)際上認(rèn)可的金標(biāo)準(zhǔn)方法包括動(dòng)物體內(nèi)中和試驗(yàn)和細(xì)胞中和試驗(yàn)。由于動(dòng)物中和試驗(yàn)常采用較多動(dòng)物,花費(fèi)周期較長(zhǎng),目前已不多用。細(xì)胞中和試驗(yàn)方法有熒光抗體病毒中和試驗(yàn)（Fluorescent antibody virus neutralization,FAVN）和快速熒光灶抑制試驗(yàn)（Rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT）兩種。但這兩種方法通常需要在23個(gè)工作日才能完成,并涉及活毒...
【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院北京市
【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
重組質(zhì)粒pCMV-Ge的酶切鑒定Fig.1-1RestrictionenzymedigestionofrecombinantplasmidpCMV-Ge
0、400、500、600、700、800μg/ml）后，在 1-3 天時(shí)，高濃出現(xiàn)明顯的生長(zhǎng)減慢現(xiàn)象，在 4-5 天后細(xì)胞開始皺縮，破 天時(shí)，600μg/ml以及更高濃度的各孔細(xì)胞全部死亡，鏡下3 細(xì)胞；而不加壓孔細(xì)胞鋪滿底壁。即 600μg/ml的 zeocin的生長(zhǎng)。為更精確的篩選到陽(yáng)性克隆，筆者最終選取略高g/ml作為轉(zhuǎn)染后篩選陽(yáng)性克隆的最佳藥物濃度；在完成陽(yáng)用 600μg/ml的藥物濃度維持陽(yáng)性細(xì)胞系在加壓條件下的的篩選后的細(xì)胞與正常細(xì)胞混合鋪板并施加以 zeocin藥物壓力后到部分存活下來(lái)并有分裂能力的疑似陽(yáng)性細(xì)胞，到第 20依靠自身不斷分裂聚成一小塊細(xì)胞集合，鏡下觀察如圖 此類細(xì)胞克隆，不斷維持其生長(zhǎng)傳代后，收集表達(dá)產(chǎn)物作A B
圖 1-3 表達(dá)產(chǎn)物的 ELISA 檢測(cè)1-3 Detection of the reactivity of expression products using 物的 Western Blot 檢測(cè) ELISA 方法檢測(cè)到部分能夠同時(shí)與抗 his 標(biāo)簽單抗與抗 應(yīng)的細(xì)胞株后，選取細(xì)胞株 3 的表達(dá)上清，進(jìn)行 Wester白的大小。反應(yīng)結(jié)果如圖 1-4，兩抗體的 WB 結(jié)果均顯示了特異性條帶，與預(yù)期相符，證明 RABV 糖蛋白膜外區(qū)樣品名稱M 1 2M 1 2 3A B
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]狂犬病病毒不同毒株糖蛋白免疫原性的比較研究[J]. 陳騰,張錦霞,張靜遠(yuǎn),陳奇,張菲,米麗娟,張守峰,扈榮良. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2016(04)
[2]狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外區(qū)的原核表達(dá)及純化[J]. 鞠美芳,殷相平,柳紀(jì)省. 生物技術(shù)通報(bào). 2012(09)
[3]狂犬病病毒N蛋白主要抗原區(qū)的表達(dá)及SPA-ELISA抗體檢測(cè)方法的建立[J]. 曾妮,宮苗苗,郭李平,邱文英,李剛. 生物工程學(xué)報(bào). 2011(08)
[4]狂犬病病毒糖蛋白膜外區(qū)基因在大腸埃希氏菌中的高效表達(dá)[J]. 蔡月琴,葉菊秀,李玲燕,周繼勇. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2006(06)
碩士論文
[1]兩株狂犬病病毒糖蛋白的桿狀病毒表達(dá)及其免疫原性研究[D]. 陳奇.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2013
本文編號(hào)：3514848
【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍軍事科學(xué)院北京市
【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
重組質(zhì)粒pCMV-Ge的酶切鑒定Fig.1-1RestrictionenzymedigestionofrecombinantplasmidpCMV-Ge
0、400、500、600、700、800μg/ml）后，在 1-3 天時(shí)，高濃出現(xiàn)明顯的生長(zhǎng)減慢現(xiàn)象，在 4-5 天后細(xì)胞開始皺縮，破 天時(shí)，600μg/ml以及更高濃度的各孔細(xì)胞全部死亡，鏡下3 細(xì)胞；而不加壓孔細(xì)胞鋪滿底壁。即 600μg/ml的 zeocin的生長(zhǎng)。為更精確的篩選到陽(yáng)性克隆，筆者最終選取略高g/ml作為轉(zhuǎn)染后篩選陽(yáng)性克隆的最佳藥物濃度；在完成陽(yáng)用 600μg/ml的藥物濃度維持陽(yáng)性細(xì)胞系在加壓條件下的的篩選后的細(xì)胞與正常細(xì)胞混合鋪板并施加以 zeocin藥物壓力后到部分存活下來(lái)并有分裂能力的疑似陽(yáng)性細(xì)胞，到第 20依靠自身不斷分裂聚成一小塊細(xì)胞集合，鏡下觀察如圖 此類細(xì)胞克隆，不斷維持其生長(zhǎng)傳代后，收集表達(dá)產(chǎn)物作A B
圖 1-3 表達(dá)產(chǎn)物的 ELISA 檢測(cè)1-3 Detection of the reactivity of expression products using 物的 Western Blot 檢測(cè) ELISA 方法檢測(cè)到部分能夠同時(shí)與抗 his 標(biāo)簽單抗與抗 應(yīng)的細(xì)胞株后，選取細(xì)胞株 3 的表達(dá)上清，進(jìn)行 Wester白的大小。反應(yīng)結(jié)果如圖 1-4，兩抗體的 WB 結(jié)果均顯示了特異性條帶，與預(yù)期相符，證明 RABV 糖蛋白膜外區(qū)樣品名稱M 1 2M 1 2 3A B
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]狂犬病病毒不同毒株糖蛋白免疫原性的比較研究[J]. 陳騰,張錦霞,張靜遠(yuǎn),陳奇,張菲,米麗娟,張守峰,扈榮良. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2016(04)
[2]狂犬病病毒aG株糖蛋白膜外區(qū)的原核表達(dá)及純化[J]. 鞠美芳,殷相平,柳紀(jì)省. 生物技術(shù)通報(bào). 2012(09)
[3]狂犬病病毒N蛋白主要抗原區(qū)的表達(dá)及SPA-ELISA抗體檢測(cè)方法的建立[J]. 曾妮,宮苗苗,郭李平,邱文英,李剛. 生物工程學(xué)報(bào). 2011(08)
[4]狂犬病病毒糖蛋白膜外區(qū)基因在大腸埃希氏菌中的高效表達(dá)[J]. 蔡月琴,葉菊秀,李玲燕,周繼勇. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2006(06)
碩士論文
[1]兩株狂犬病病毒糖蛋白的桿狀病毒表達(dá)及其免疫原性研究[D]. 陳奇.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2013
本文編號(hào)：3514848
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