為解決人源器官?lài)?yán)重短缺的問(wèn)題,人們希望利用動(dòng)物器官進(jìn)行異種移植。經(jīng)多方考慮,人們選擇豬作為最合適的供體。而豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒（Porcine endogenous retrovirus, PERV）普遍存在于各類(lèi)豬種中,且能夠感染人類(lèi)細(xì)胞,引起了人們的高度重視。廣西巴馬小型豬具有體型小、遺傳穩(wěn)定、遺傳背景清晰等優(yōu)點(diǎn),是異種移植的良好供體。為開(kāi)發(fā)巴馬小型豬種資源,篩選PERV低拷貝豬,為異種移植提供安全可靠的豬源器官,本研究利用納米磁珠（magnetic nanoparticles, MNPs）與化學(xué)發(fā)光（chemiluminescence, CL）技術(shù),建立了一種基于納米磁珠與化學(xué)發(fā)光的PERV檢測(cè)方法,并應(yīng)用該方法進(jìn)行了廣西巴馬小型豬PERV前病毒的檢測(cè)研究,主要內(nèi)容包括：1、納米磁珠的制備及其在血液DNA提取中的應(yīng)用采用溶劑熱法制備出Fe304納米磁珠,在其表面進(jìn)行Si02包覆,得到Fe3O4@SiO2復(fù)合磁珠,并進(jìn)行氨基化及羧基化修飾,獲得羧基功能化納米磁珠（CMNPs）。經(jīng)透射電子顯微鏡（TEM）、掃描電子顯微鏡（SEM）表征,粒徑分析,化學(xué)基團(tuán)的傅立葉變換紅外光譜（FT-IR... 

【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
縮略詞（Abbreviation）
第一章 綜述
    1.1 豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒及其檢測(cè)方法研究進(jìn)展
        1.1.1 異種移植的安全性
        1.1.2 PERV的生物學(xué)特性
        1.1.3 PERV檢測(cè)方法研究進(jìn)展
    1.2 納米磁珠與化學(xué)發(fā)光在病原體檢測(cè)中的應(yīng)用研究進(jìn)展
        1.2.1 納米磁珠及其功能化修飾
        1.2.2 主要化學(xué)發(fā)光體系
        1.2.3 基于納米磁珠與化學(xué)發(fā)光的病原體檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展
    1.3 本研究的目的和意義
第二章 納米磁珠的制備及其在血液DNA提取中的應(yīng)用
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 Fe_3O_4磁珠的制備
        2.3.2 Fe_3O_4@SiO_2復(fù)合磁珠的制備
        2.3.3 磁珠的氨基化修飾
        2.3.4 磁珠的羧基化修飾
        2.3.5 磁珠的表征
        2.3.6 巴馬小型豬血液基因組DNA的提取
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 磁珠的TEM圖
        2.4.2 磁珠的SEM圖
        2.4.3 磁珠的粒徑分布
        2.4.4 磁珠的FT-IR光譜圖
        2.4.5 磁珠的磁滯回歸曲線
        2.4.6 三種方法提取巴馬小型豬血液基因組DNA的比較
    2.5 討論
        2.5.1 納米磁珠的制備
        2.5.2 磁珠法提取DNA
    2.6 本章小結(jié)
第三章 基于納米磁珠與化學(xué)發(fā)光的PERV檢測(cè)方法的建立與優(yōu)化
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 引物、探針的設(shè)計(jì)
        3.3.2 探針修飾磁珠的制備
        3.3.3 基因組DNA的提取
        3.3.4 pol片段的生物素標(biāo)記PCR擴(kuò)增
        3.3.5 固相雜交反應(yīng)
        3.3.6 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)
        3.3.7 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        3.3.8 靈敏度實(shí)驗(yàn)
        3.3.9 PERV亞型檢測(cè)方法的建立
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 基因組DNA的提取
        3.4.2 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè)
        3.4.3 特異性檢測(cè)
        3.4.4 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
        3.4.5 檢測(cè)靈敏度
        3.4.6 PERV亞型檢測(cè)方法的建立
    3.5 討論
        3.5.1 目的片段的生物素標(biāo)記PCR擴(kuò)增
        3.5.2 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化
    3.6 本章小結(jié)
第四章 廣西巴馬小型豬PERV相對(duì)拷貝數(shù)的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 內(nèi)參GAPDH的引物、探針設(shè)計(jì)
        4.3.2 探針修飾磁珠的制備
        4.3.3 基因組DNA的提取
        4.3.4 內(nèi)參GAPDH片段的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法的建立
        4.3.5 pol與GAPDH片段的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)
        4.3.6 env-A、env-B、env-C與GAPDH片段的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)
        4.3.7 PERV相對(duì)拷貝數(shù)的分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 內(nèi)參GAPDH片段的PCR擴(kuò)增
        4.4.2 內(nèi)參GAPDH片段的特異性檢測(cè)
        4.4.3 PERV的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)
        4.4.4 PERV三種亞型的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)
        4.4.5 PERV相對(duì)拷貝數(shù)的分析
    4.5 討論
    4.6 本章小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 論文工作總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3514678