為了建立豬肺泡巨噬細(xì)胞（PAMs）不同亞型及研究不同亞型與PRRSV之間的關(guān)系,本試驗(yàn)在體外通過IFN-y/LPS誘導(dǎo)PAMs分化成M1型巨噬細(xì)胞,通過IL-4誘導(dǎo)分化成M2型巨噬細(xì)胞。通過Calcein-AM染色和電鏡觀察不同組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。通過M1型巨噬細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志分子NO、IL-12鑒定M1型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)分化成功,通過M2型巨噬細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志分子Arg-1、IL-10鑒定M2型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)分化成功。正常的PAMs感染PRRSV后,測定M1、M2相關(guān)性分子的表達(dá)量,擬研究PAMs感染PRRSV后極化類型。體外成功刺激M1和M2不同亞型的PAMs與PRRSV共培養(yǎng),通過測定M1、M2相關(guān)性分子,擬研究PRRSV對M1和M2兩種亞型PAMs的影響。為了檢測NO的表達(dá)量,不同組細(xì)胞24h后提取上清,Griess法檢測各組NO表達(dá)量顯示,IFN-γ/LPS刺激的PAMs組相比較未刺激組和IL-4刺激組高表達(dá),顯示出極顯著差異（P<0.01）。不同組細(xì)胞培養(yǎng)刺激24～72h,48h提取蛋白,Western結(jié)果顯示,IL-4刺激的PAMs組相比較IFN-γ/LPS刺激組和未刺激組高表達(dá),... 

【文章來源】：延邊大學(xué)吉林省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
    1 豬繁殖與呼吸綜合征概述
        1.1 豬繁殖與呼吸綜合征概述
    2 PRRSV概述
        2.1 PRRSV分子生物學(xué)與病原學(xué)概述
        2.2 HP-PRRSV概述
    3 巨噬細(xì)胞概述
        3.1 巨噬細(xì)胞來源及特異性標(biāo)志
        3.2 巨噬細(xì)胞的分類
        3.3 巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用
    4. 巨噬細(xì)胞亞型研究現(xiàn)狀
        4.1 巨噬細(xì)胞不同亞型分類及其差異性研究概述
        4.2 影響巨噬細(xì)胞極化的分子機(jī)制研究概述
        4.3 M1型巨噬細(xì)胞和M2型巨噬細(xì)胞作用研究
    5 PRRSV與豬肺泡巨噬細(xì)胞之間的關(guān)系
    6 本試驗(yàn)研究的目的和意義
材料與方法
    1 材料
        1.1 病毒株與試驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 試驗(yàn)用主要藥品及試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 試驗(yàn)所需主要試劑的配制
    2 方法
        2.1 PAMs的制取及純度鑒定
        2.2 PAMs Calcein-AM染色形態(tài)學(xué)觀察
        2.3 各組PAMs電鏡觀察
        2.4 M1和M2兩種亞型PAMs體外誘導(dǎo)試驗(yàn)
        2.5 Griess試劑檢測NO的濃度
        2.6 Western blotting法檢測不同刺激組PAMs Arg-1,IL-10,IL-12蛋白的表達(dá)
        2.7 PAMs感染PRRSV后細(xì)胞極化類型研究試驗(yàn)
        2.8 PRRSV對M1和M2型兩種PAMs影響研究
        2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析
結(jié)果
    1 PAMs純度鑒定
    2 M1和M2兩種亞型PAMs模型的建立
    3 PAMs感染PRRSV前后形態(tài)變化
    4 PAMs感染PRRSV后極化類型試驗(yàn)結(jié)果
    5 PRRSV對M1和M2兩種亞型PAMs影響研究
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Heat Shock Protein and Innate Immunity[J]. Min-Fu Tsan.  Cellular & Molecular Immunology. 2004(04)



本文編號(hào)：3513539