隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)水平和國(guó)民生活水平的提高,對(duì)于禽肉類(lèi)產(chǎn)品的消費(fèi)需求也由從前的數(shù)量漸漸轉(zhuǎn)變?yōu)橘|(zhì)量。因此,遺傳育種工作者的工作重心也開(kāi)始由改善生產(chǎn)性能轉(zhuǎn)向肉質(zhì)性狀。通過(guò)DNA甲基化、分子標(biāo)記、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等技術(shù)篩選肉質(zhì)性狀相關(guān)功能基因,并且運(yùn)用RNA干擾、基因過(guò)表達(dá)等相關(guān)技術(shù)對(duì)其功能進(jìn)行闡明。前期研究表明,汶上蘆花雞胸肌組織全基因組DNA甲基化水平與肌纖維密度和剪切力顯著相關(guān),同時(shí)在其中篩選出LRP1的特異性甲基化片段,但LRP1是否與肉質(zhì)性狀存在相關(guān)性,以及如何調(diào)控肉質(zhì)性狀還不明確。本研究以汶上蘆花雞為對(duì)象,分析胸肌組織中LRP1表達(dá)水平與肉質(zhì)性狀的相關(guān)性。結(jié)果表明,LRP1 m RNA表達(dá)水平與肉質(zhì)性狀中的剪切力和肌纖維密度顯著相關(guān)（P<0.05）,與其他肉質(zhì)性狀無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。影響剪切力的主要因素是肌纖維特性,其與肌纖維發(fā)育密切相關(guān),同時(shí)肌纖維密度也是肌纖維生長(zhǎng)發(fā)育程度重要的衡量指標(biāo)之一。為解析LRP1對(duì)肉質(zhì)性狀的調(diào)控機(jī)制,本研究通過(guò)構(gòu)建雞的LRP1的RNA干擾載體,并將其轉(zhuǎn)染入雞胚成肌細(xì)胞,驗(yàn)證LRP1沉默后對(duì)與肌纖維生長(zhǎng)發(fā)育及細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響。研究... 

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【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

胸肌組織總RNA電泳圖

2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)分析處理由 SPSS 22.0 軟件完成，相關(guān)基因熒光定量結(jié)果的 Ct 值t方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，將計(jì)算出的 2-△△Ct定義為該基因的表達(dá)水平。相關(guān)基平的分析方法采用單因素方差分析法。結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤形式呈 P<0.5，**代表 P<0.01。果 LRP1 干擾載體轉(zhuǎn)染雞胚成肌細(xì)胞LRP1 干擾載體轉(zhuǎn)染雞胚成肌細(xì)胞 24 h 后，在熒光顯微鏡下觀察并采集 2.1。

A、C、E 分別為轉(zhuǎn)染 LRP1 RNAi 載體、shNC 空白載體以及陰性對(duì)照組胞在普通顯微鏡下的狀態(tài)（200×）；B、D、F 分別為轉(zhuǎn)染 LRP1 RNAi 載體、sh白載體以及陰性對(duì)照組的細(xì)胞在綠色熒光顯微鏡下的狀態(tài)（200×），可以看轉(zhuǎn)染干擾載體和空白載體的細(xì)胞中均能觀察到綠色熒光，且轉(zhuǎn)染效率較高陰性對(duì)照組中并未觀察到熒光。此結(jié)果表明轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)較為成功，可以進(jìn)行后驗(yàn)。.2 細(xì)胞總 RNA 提取結(jié)果提取的細(xì)胞總 RNA 經(jīng) Nanodrop 2000 分光光度計(jì)檢測(cè)，OD 260/280 比值 2.0 左右，瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，RNA 條帶清晰未降解，符合質(zhì)量要用于后續(xù)試驗(yàn)。電泳結(jié)果見(jiàn)圖 2.2。

【參考文獻(xiàn)】：
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