豬瘟（Classical Swine Fever，CSF）是由豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的豬的高度接觸性、致死性傳染性疾病，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大威脅和經濟損失。本研究建立了CSFV QuantiGene ViewRNA原位雜交檢測方法；并采用建立的CSFV QuantiGene ViewRNA原位雜交方法初步應用于CSFV RNA在體外感染細胞中的增殖動態(tài)研究和體內感染組織的CSFVRNA檢測。為了高效檢測和準確定位CSFV并探究CSFV RNA在體外感染細胞中的復制動態(tài)和分布規(guī)律，本研究分別設計并合成了CSFV RNA和豬內參基因β-actin的多條特異性探針，對培養(yǎng)于PK15細胞系中的CSFV中等致病力毒株HeBHH1/95（TCID-.550為104/200μL）進行研究。并采用正交試驗方法優(yōu)化反應條件，根據(jù)檢測結果、熒光強度、重復性等因素，確定CSFV QuantiGeneViewRNA原位雜交反應的關鍵要素，蛋白酶K最優(yōu)濃度為1:1000，甲醛最優(yōu)固定時間為30min。在熒光共聚焦顯微鏡下，陽性樣本可檢測到明亮的紅色熒光。通過... 

【文章來源】：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所北京市

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

CSFV基因結構模式圖（圖片引自MartinBetal.2007）

QuantiGeneViewRNA技術工作原理圖解

CSFVQuantiGeneViewRNA原位雜交方法建立結果圖

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]豬瘟慢性感染對豬免疫功能影響的細胞與分子機制研究[D]. 陳鍇.四川農業(yè)大學 2012

碩士論文
[1]CSFV SM株感染對豬外周血白細胞的影響以及在豬體內的分布[D]. 周遠成.四川農業(yè)大學 2009
[2]豬瘟病毒原位RT-PCR檢測方法的建立及分子致病機理的初步研究[D]. 秦玉明.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 2003



本文編號：3509808