MicroRNAs （miRNAs）是一類長約22 nt、單鏈、高度保守、內(nèi)源性、非編碼的小RNA分子,在真核生物中廣泛存在,主要通過與靶基因mRNA3’非編碼區(qū)互補結(jié)合來抑制表達或使其降解,進而在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因的表達。研究表明,有大量的miRNA偏向于在睪丸和生殖細胞中表達,并且在性成熟前與性成熟睪丸中的表達模式也不同,這也暗示了miRNA在睪丸和生殖細胞中的重要作用。同時,豬也是一種重要的農(nóng)業(yè)經(jīng)濟動物和醫(yī)學(xué)研究模型,并且高通量測序技術(shù)可以準(zhǔn)確、快速、批量地檢測樣本的miRNA,所以,選擇用高通量測序的技術(shù)分析豬睪丸組織性成熟前后的miRNA表達譜并比較分析,以探究miRNA在睪丸發(fā)育和生精調(diào)控中的重要作用,揭示miRNA在哺乳動物生精過程中的調(diào)控機制和促進不育的治療。于是,本實驗利用高通量測序的技術(shù),分別構(gòu)建了性成熟前和性成熟兩個不同時期的豬睪丸組織的miRNAs表達譜,分析不同時期miRNA表達譜的特點并進行比較,主要研究結(jié)果如下：1.用高通量測序的方法,本實驗成功構(gòu)建了豬性成熟前（20天）和性成熟（210天）睪丸組織的miRNA表達譜,共獲得了超過20M的高質(zhì)量的序列（read... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
1 文獻綜述
    1.1 miRNA研究進展
        1.1.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 miRNA的生物合成
        1.1.3 miRNA作用機制
        1.1.4 miRNA研究方法
    1.2 哺乳動物生殖發(fā)生與miRNA研究現(xiàn)狀
        1.2.1 哺乳動物的精子發(fā)生過程
        1.2.2 miRNA與精子發(fā)生
        1.2.3 睪丸組織中miRNA的表達
    1.3 實時熒光定量PCR(RT-PCR)
        1.3.1 實時熒光定量PCR的技術(shù)原理
        1.3.2 熒光定量PCR的定量方法
        1.3.3 miRNA熒光定量PCR
    1.4 本實驗研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
    2.2 試驗時間與地點
    2.3 主要儀器
    2.4 主要試劑
    2.5 RNA的制備
        2.5.1 RNA提取主要步驟
        2.5.2 RNA質(zhì)量檢測
    2.6. 小RNA建庫測序
    2.7 測序數(shù)據(jù)的處理
        2.7.1 測序數(shù)據(jù)過濾與定位比對
        2.7.2 測序數(shù)據(jù)的分類
    2.8 差異分析
    2.9 Q-PCR驗證
        2.9.1 cDNA的制備
        2.9.2 Real-time PCR
    2.10 靶基因的預(yù)測和功能分析
    2.11 數(shù)據(jù)庫及分析軟件
3 結(jié)果與分析
    3.1 RNA質(zhì)檢結(jié)果
    3.2 高通量數(shù)據(jù)結(jié)果
    3.3 豬睪丸組織的miRNA轉(zhuǎn)錄組的鑒別和特征
    3.4 豬睪丸組織中高表達的miRNAs
    3.5 豬睪丸組織中差異表達的miRNA
    3.6 靶基因預(yù)測和功能分析
    3.7 miRNA的染色體分布
4 討論
    4.1 高通量的高檢測率
    4.2 高表達的miRNAs具有顯著調(diào)控作用
    4.3 差異表達的miRNA參與調(diào)控生精過程
    4.4 miRNA的X染色體趨向性表達
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3505662