發(fā)布時間：2021-11-18 18:18

　　為探究金堂黑山羊白介素-10蛋白（IL-10）在金黃色葡萄球菌感染免疫反應(yīng)中的調(diào)節(jié)機制,本研究構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒pET32a-IL-10,經(jīng)誘導(dǎo)后表達純化獲得山羊重組IL-10蛋白（rIL-10）,SDS-PAGE和western blot鑒定結(jié)果顯示,山羊IL-10在大腸桿菌中以包涵體形式表達,重組蛋白大小約為27 ku。每組5只通過金黃色葡萄球菌感染小鼠試驗研究rIL-10的免疫調(diào)節(jié)作用,將15只SPF小鼠隨機分為A、B和C組,A組為正常對照組,B和C組腹腔注射500μL金黃色葡萄球菌（1×108cfu/mL）,感染24 h后C組腹腔注射200μg/kg rIL-10,感染48 h后檢測各組小鼠血清學(xué)指標和3種炎癥因子在其6種組織中的轉(zhuǎn)錄水平,結(jié)果顯示,B組小鼠血清丙二醛MDA含量極顯著高于A和C組（p<0.01）,總抗氧化能力T-AOC和谷胱甘肽過氧化物GSH-PX酶活性極顯著低于A和C組（p<0.01）;IL-1β基因轉(zhuǎn)錄水平在B組小鼠心、肝、肺和腎中極顯著高于A組（p<0.01）,在C組小鼠心、肝、脾和肺中低于B組（p<0.01）,在脾和腎中低于A組（... 

【文章來源】：中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2020,42(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒p ET32a-IL-10酶切鑒定

重組菌p ET32a-IL-10/DE3經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后SDS-PAGE檢測，結(jié)果顯示出現(xiàn)約為27 ku的目的重組蛋白條帶，且目的蛋白主要以包涵體形式表達（圖2A）。經(jīng)純化復(fù)性后，SDS-PAGE顯示在約27 ku處有單一條帶（圖2B），表明得到了純化的r IL-10。Western blot鑒定結(jié)果顯示出現(xiàn)特異性條帶（圖2C），進一步表明表達得到r IL-10。2.3 r IL-10對各組小鼠血清學(xué)指標的影響

利用T-AOC檢測試劑盒（ABTS法）、GSH-PX測定試劑盒（比色法）和MDA測定試劑盒（TBA法）分別測定各組小鼠血清T-AOC、GSH-PX和MDA含量，結(jié)果顯示，B組小鼠血清MDA含量增加，極顯著高于A組（p<0.01),T-AOC和GSH-PX酶活性下降，極顯著低于A組（p<0.01）。C組小鼠MDA含量下降，極顯著低于B組（p<0.01），與A組小鼠差異不顯著。C組小鼠T-AOC增加，極顯著高于B組（p<0.01），與A組差異不顯著，C組小鼠GSH-PX極顯著高于A組和B組（p<0.01）（圖3）。表明經(jīng)金黃色葡萄球菌感染致使小鼠抗氧化能力減弱，機體受到了一定的損傷，但經(jīng)r IL-10處理后小鼠的機體損傷得到了一定的修復(fù)。2.4 r IL-10對炎癥因子轉(zhuǎn)錄水平的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]急性胰腺炎患者血清IL-6、IL-10水平變化及其與淋巴細胞自噬凋亡的相關(guān)性[J]. 潘靜,覃月秋,徐晨陽,梁云軒,宋嗣恩,季科,楊復(fù)鏘,周喜漢,黃贊松.  山東醫(yī)藥. 2019(27)
[2]阿奇霉素聯(lián)合卡介菌多糖核酸對糖尿病合并金黃色葡萄球菌肺炎的療效[J]. 李衍生,陳煥明,李英海.  醫(yī)學(xué)理論與實踐. 2019(14)
[3]山羊皮下膿腫的病原分離與鑒定[J]. 張斯旂,刀筱芳,李垚,馬媛,楊發(fā)龍.  中國畜牧獸醫(yī). 2019(03)
[4]金堂黑山羊白介素10基因的克隆及表達分析[J]. 方慶,王利.  中國畜牧獸醫(yī). 2018(12)
[5]扎布耶鹽山羊金黃色葡萄球菌分離鑒定及藥敏試驗[J]. 何冰梅,馬弘財,德吉.  畜牧與飼料科學(xué). 2018(11)
[6]羊葡萄球菌病的防治[J]. 鐘彩娃,王琪.  中獸醫(yī)學(xué)雜志. 2017(02)
[7]雞白介素10（chIL-10）單克隆抗體的制備及鑒定[J]. 高俊峰,柳亞楠,王永強,曹紅,李曉齊,鄭世軍.  中國獸醫(yī)雜志. 2016(12)
[8]豬IL-10基因的原核表達純化及功能鑒定[J]. 高麗,曹麗.  中國獸醫(yī)雜志. 2016(05)
[9]斜帶石斑魚IL-10基因的克隆及其原核表達[J]. 肖周婷,黃郁蔥,簡紀常,魯義善,吳灶和.  生物技術(shù)通報. 2015(09)
[10]牛源金黃色葡萄球菌感染小鼠后藥物敏感性變化及其誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激[J]. 楊峰,王旭榮,田永剛,王玲,李新圃,羅金印,李宏勝.  動物醫(yī)學(xué)進展. 2013(12)

碩士論文
[1]枯草芽孢桿菌glnA和glnR基因的鑒定及其對氨氮的應(yīng)答[D]. 吳開年.西南民族大學(xué) 2019
[2]感染金黃色葡萄球菌后小尾寒羊乳腺組織及外周血中TLRs和CK的表達[D]. 陳佳佳.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]分枝桿菌LpqT蛋白可抑制巨噬細胞炎性因子的表達及凋亡以促進細菌在體內(nèi)生存[D]. 李鳳格.蘇州大學(xué) 2017



本文編號：3503376