肌生成是一個(gè)復(fù)雜而精確的過(guò)程,并受到一些非編碼RNA和信號(hào)通路的高度調(diào)控。環(huán)狀RNAs（circRNAs）是一類新型內(nèi)源性非編碼RNA,在絕大多數(shù)真核生物轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮調(diào)節(jié)功能。雖然在多個(gè)物種和組織中已鑒定出一些cirRNAs,但其調(diào)控的分子機(jī)制仍不太明確。在本研究中,利用牛骨骼肌circRNAs測(cè)序數(shù)據(jù),篩選并鑒定了一個(gè)來(lái)自宿主SNX29基因的候選circRNA,并將其命名為circSNX29,并進(jìn)一步探究其在肌肉發(fā)育過(guò)程中的調(diào)控作用。超表達(dá)circSNX29促進(jìn)成肌細(xì)胞分化,抑制細(xì)胞增殖,而干擾circSNX29抑制其分化,促進(jìn)增殖。隨后,利用RNAhybrid進(jìn)行生物信息學(xué)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),circSNX29可能吸附到miR-744,具有9個(gè)潛在的結(jié)合位點(diǎn)。利用雙熒光素酶報(bào)告分析實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,circSNX29能夠直接與miR-744競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合,并有效地扭轉(zhuǎn)miR-744對(duì)Wnt5a和CaMKIIδ的抑制作用。重要的是,通過(guò)KEGG通路富集分析、Western blotting、鈣離子熒光探針和CamKII活性檢測(cè)等實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn),超表達(dá)Wnt5a和circSNX29通過(guò)增加CamKI... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
文獻(xiàn)綜述
    第一章 非編碼RNA在骨骼肌中的研究進(jìn)展
        1.1 骨骼肌的功能與肌生成
        1.2 miRNAs研究進(jìn)展
            1.2.1 miRNAs產(chǎn)生的概述
            1.2.2 miRNAs的作用機(jī)制
            1.2.3 肌生成相關(guān)miRNAs
        1.3 肌生成相關(guān)信號(hào)通路
        1.4 circRNAs研究進(jìn)展
            1.4.1 circRNAs的發(fā)現(xiàn)
            1.4.2 circRNAs的產(chǎn)生及分類
            1.4.3 circRNAs的分子功能
試驗(yàn)研究
    第二章 牛肌生成相關(guān)miR-744 通過(guò)靶向抑制Wnt5a調(diào)控肌細(xì)胞增殖和分化
        2.1 材料與方法
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備
            2.1.2 牛肌原代細(xì)胞分離培養(yǎng)及凍存
            2.1.3 載體構(gòu)建
            2.1.4 雙熒光素酶報(bào)告分析
            2.1.5 增殖試驗(yàn)
            2.1.6 免疫熒光試驗(yàn)
            2.1.7 總RNA提取及RT-qPCR
            2.1.8 總蛋白提取和Western blotting試驗(yàn)
            2.1.9 數(shù)據(jù)分析
        2.2 結(jié)果與分析
            2.2.1 秦川牛骨骼肌中miR-744 的鑒定
            2.2.2 超表達(dá)miR-744 促進(jìn)成肌細(xì)胞增殖
            2.2.3 超表達(dá)miR-744 抑制成肌細(xì)胞分化
            2.2.4 miR-744 直接靶向Wnt5a基因
            2.2.5 超表達(dá)Wnt5a抑制細(xì)胞分化,并促進(jìn)細(xì)胞增殖
        2.3 討論
        2.4 小結(jié)
    第三章 circ SNX29 調(diào)控成肌細(xì)胞增殖與分化的機(jī)制研究
        3.1 材料與方法
            3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備
            3.1.2 牛肌原代細(xì)胞分離及培養(yǎng)
            3.1.3 核質(zhì)分離試驗(yàn)
            3.1.4 總RNA提取及RT-qPCR
            3.1.5 載體構(gòu)建
            3.1.6 增殖及周期測(cè)定試驗(yàn)
            3.1.7 免疫熒光試驗(yàn)
            3.1.8 miR-744 Sensor試驗(yàn)及熒光素酶報(bào)告分析
            3.1.9 總蛋白提取和Western blotting試驗(yàn)
            3.1.10 數(shù)據(jù)分析
        3.2 結(jié)果與分析
            3.2.1 秦川牛骨骼肌中circSNX29 的鑒定
            3.2.2 circSNX29 主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)
            3.2.3 circSNX29 競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-744 調(diào)控Wnt5a的表達(dá)
            3.2.4 circSNX29 通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合mi R-744 促進(jìn)肌細(xì)胞分化
            3.2.5 circSNX29 通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合mi R-744 抑制肌細(xì)胞增殖
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
    第四章 circ SNX29 通過(guò)吸附miR-744 激活Wnt5a/Ca~(2+)信號(hào)通路調(diào)控成肌細(xì)胞增殖及分化
        4.1 材料與方法
            4.1.1 牛肌原代細(xì)胞分離及培養(yǎng)
            4.1.2 試驗(yàn)儀器與試劑
            4.1.3 總RNA提取及RT-qPCR
            4.1.4 細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)濃度測(cè)定
            4.1.5 CamKII激酶活性檢測(cè)
            4.1.6 總蛋白提取及Western blotting試驗(yàn)
            4.1.7 KEGG富集分析
            4.1.8 數(shù)據(jù)分析
        4.2 結(jié)果與分析
            4.2.1 利用KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)和Omicsbean篩選Wnt5a/Ca~(2+)信號(hào)通路
            4.2.2 超表達(dá)circSNX29和Wnt5a通過(guò)激活Wnt5a/Ca~(2+)信號(hào)通路調(diào)控成肌細(xì)胞增殖分化
        4.3 討論
        4.4 小結(jié)
結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
    結(jié)論
    創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]27nt-miRNA對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞向血管平滑肌細(xì)胞分化的影響[J]. 沈鳳,楊鵬,陶曉靜,顏淵鴛,李丹,歐和生.  生物工程學(xué)報(bào). 2019(02)
[2]中國(guó)黃牛選育改良及肉牛種業(yè)發(fā)展建議[J]. 昝林森,梅楚剛,王洪程.  中國(guó)牛業(yè)科學(xué). 2016(06)
[3]秦川牛種質(zhì)資源保護(hù)利用、存在問(wèn)題及對(duì)策建議[J]. 昝林森,王洪程,梅楚剛,王應(yīng)海.  中國(guó)牛業(yè)科學(xué). 2014(06)
[4]從中國(guó)黃牛的歷史談現(xiàn)代黃牛的選育[J]. 王雅春,陳幼春,張沅.  中國(guó)牛業(yè)科學(xué). 2012(03)



本文編號(hào)：3503368