肌生成是一個復雜而精確的過程,并受到一些非編碼RNA和信號通路的高度調(diào)控。環(huán)狀RNAs（circRNAs）是一類新型內(nèi)源性非編碼RNA,在絕大多數(shù)真核生物轉錄后水平發(fā)揮調(diào)節(jié)功能。雖然在多個物種和組織中已鑒定出一些cirRNAs,但其調(diào)控的分子機制仍不太明確。在本研究中,利用牛骨骼肌circRNAs測序數(shù)據(jù),篩選并鑒定了一個來自宿主SNX29基因的候選circRNA,并將其命名為circSNX29,并進一步探究其在肌肉發(fā)育過程中的調(diào)控作用。超表達circSNX29促進成肌細胞分化,抑制細胞增殖,而干擾circSNX29抑制其分化,促進增殖。隨后,利用RNAhybrid進行生物信息學預測發(fā)現(xiàn),circSNX29可能吸附到miR-744,具有9個潛在的結合位點。利用雙熒光素酶報告分析實驗,結果顯示,circSNX29能夠直接與miR-744競爭性結合,并有效地扭轉miR-744對Wnt5a和CaMKIIδ的抑制作用。重要的是,通過KEGG通路富集分析、Western blotting、鈣離子熒光探針和CamKII活性檢測等實驗,結果發(fā)現(xiàn),超表達Wnt5a和circSNX29通過增加CamKI... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
文獻綜述
    第一章 非編碼RNA在骨骼肌中的研究進展
        1.1 骨骼肌的功能與肌生成
        1.2 miRNAs研究進展
            1.2.1 miRNAs產(chǎn)生的概述
            1.2.2 miRNAs的作用機制
            1.2.3 肌生成相關miRNAs
        1.3 肌生成相關信號通路
        1.4 circRNAs研究進展
            1.4.1 circRNAs的發(fā)現(xiàn)
            1.4.2 circRNAs的產(chǎn)生及分類
            1.4.3 circRNAs的分子功能
試驗研究
    第二章 牛肌生成相關miR-744 通過靶向抑制Wnt5a調(diào)控肌細胞增殖和分化
        2.1 材料與方法
            2.1.1 實驗材料準備
            2.1.2 牛肌原代細胞分離培養(yǎng)及凍存
            2.1.3 載體構建
            2.1.4 雙熒光素酶報告分析
            2.1.5 增殖試驗
            2.1.6 免疫熒光試驗
            2.1.7 總RNA提取及RT-qPCR
            2.1.8 總蛋白提取和Western blotting試驗
            2.1.9 數(shù)據(jù)分析
        2.2 結果與分析
            2.2.1 秦川牛骨骼肌中miR-744 的鑒定
            2.2.2 超表達miR-744 促進成肌細胞增殖
            2.2.3 超表達miR-744 抑制成肌細胞分化
            2.2.4 miR-744 直接靶向Wnt5a基因
            2.2.5 超表達Wnt5a抑制細胞分化,并促進細胞增殖
        2.3 討論
        2.4 小結
    第三章 circ SNX29 調(diào)控成肌細胞增殖與分化的機制研究
        3.1 材料與方法
            3.1.1 實驗材料準備
            3.1.2 牛肌原代細胞分離及培養(yǎng)
            3.1.3 核質分離試驗
            3.1.4 總RNA提取及RT-qPCR
            3.1.5 載體構建
            3.1.6 增殖及周期測定試驗
            3.1.7 免疫熒光試驗
            3.1.8 miR-744 Sensor試驗及熒光素酶報告分析
            3.1.9 總蛋白提取和Western blotting試驗
            3.1.10 數(shù)據(jù)分析
        3.2 結果與分析
            3.2.1 秦川牛骨骼肌中circSNX29 的鑒定
            3.2.2 circSNX29 主要表達于細胞質
            3.2.3 circSNX29 競爭性結合miR-744 調(diào)控Wnt5a的表達
            3.2.4 circSNX29 通過競爭性結合mi R-744 促進肌細胞分化
            3.2.5 circSNX29 通過競爭性結合mi R-744 抑制肌細胞增殖
        3.3 討論
        3.4 小結
    第四章 circ SNX29 通過吸附miR-744 激活Wnt5a/Ca~(2+)信號通路調(diào)控成肌細胞增殖及分化
        4.1 材料與方法
            4.1.1 牛肌原代細胞分離及培養(yǎng)
            4.1.2 試驗儀器與試劑
            4.1.3 總RNA提取及RT-qPCR
            4.1.4 細胞內(nèi)Ca~(2+)濃度測定
            4.1.5 CamKII激酶活性檢測
            4.1.6 總蛋白提取及Western blotting試驗
            4.1.7 KEGG富集分析
            4.1.8 數(shù)據(jù)分析
        4.2 結果與分析
            4.2.1 利用KEGG數(shù)據(jù)庫和Omicsbean篩選Wnt5a/Ca~(2+)信號通路
            4.2.2 超表達circSNX29和Wnt5a通過激活Wnt5a/Ca~(2+)信號通路調(diào)控成肌細胞增殖分化
        4.3 討論
        4.4 小結
結論與創(chuàng)新點
    結論
    創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]27nt-miRNA對間充質干細胞向血管平滑肌細胞分化的影響[J]. 沈鳳,楊鵬,陶曉靜,顏淵鴛,李丹,歐和生.  生物工程學報. 2019(02)
[2]中國黃牛選育改良及肉牛種業(yè)發(fā)展建議[J]. 昝林森,梅楚剛,王洪程.  中國牛業(yè)科學. 2016(06)
[3]秦川牛種質資源保護利用、存在問題及對策建議[J]. 昝林森,王洪程,梅楚剛,王應海.  中國牛業(yè)科學. 2014(06)
[4]從中國黃牛的歷史談現(xiàn)代黃牛的選育[J]. 王雅春,陳幼春,張沅.  中國牛業(yè)科學. 2012(03)



本文編號：3503368