膜聯(lián)蛋白A2（AnnexinA2,ANXA2）是屬于鈣依賴性膜磷脂聯(lián)結(jié)蛋白家族中的一員,在動(dòng)物的多種組織與細(xì)胞內(nèi)廣泛存在,主要參與細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡、囊泡運(yùn)輸、離子通道、細(xì)胞骨架形成等功能。研究表明,雞卵泡膜細(xì)胞不僅能分泌雌激素,還能調(diào)控卵泡膜細(xì)胞中ANXA2的表達(dá),并且卵泡膜中ANXA2基因的表達(dá)上調(diào)與卵泡發(fā)育密切相關(guān)。為探索ANXA2在雞卵泡膜中發(fā)揮的作用,本研究首先對(duì)雞ANXA2基因進(jìn)行克隆和生物信息分析,通過(guò)構(gòu)建雞ANXA2基因重組原核載體,進(jìn)行重組蛋白His-ANXA2的原核表達(dá)和純化,同時(shí)利用His pull-down和質(zhì)譜技術(shù)從雞卵泡膜細(xì)胞中篩選與雞ANXA2相互作用的細(xì)胞蛋白。1雞ANXA2基因的克隆與生物信息學(xué)分析通過(guò)RT-PCR從雞卵泡膜細(xì)胞中擴(kuò)增ANXA2基因CDS區(qū),將其亞克隆至原核表達(dá)載體pET-32a（+）構(gòu)建重組原核表達(dá)載體pET-32a-ANXA2,并運(yùn)用生物信息學(xué)軟件對(duì)雞ANXA2進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果顯示,雞ANXA2基因編碼區(qū)全長(zhǎng)為1020 bp,共編碼339個(gè)氨基酸,理論pI為6.92,分子量約為38.6 Ku。雞ANXA2蛋白具有豐富的二級(jí)... 

【文章來(lái)源】：貴州大學(xué)貴州省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

體外培養(yǎng)的雞卵泡膜細(xì)胞

用特異性引物從雞胚成纖維細(xì)胞總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA中通過(guò)PCR擴(kuò)增得到約1053 bp的特異性擴(kuò)增條帶(圖1.2A),與預(yù)期目的片段大小一致。對(duì)獲得的重組原核表達(dá)載體經(jīng)過(guò)XhoⅠ和Bam HⅠ酶切電泳,獲得約5900 bp的載體條帶和1053 bp的目的基因條帶(圖1.2B)。將獲得的陽(yáng)性重組原核表達(dá)載體送公司測(cè)序,比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)雞ANXA2基因正確插入到原核表達(dá)載體pET-32a(+),并且未發(fā)生堿基的突變,說(shuō)明成功構(gòu)建重組原核表達(dá)載體pET-32a-ANXA2。3.3 雞ANXA2基因的生物信息學(xué)分析

雞ANXA2基因開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)度為1020 bp,共編碼339個(gè)氨基酸,其中含量較高的氨基酸有亮氨酸(35個(gè),占比10.3%)、賴氨酸(33個(gè),占比9.7%)、天冬氨酸(27個(gè),占比8.0%),含量較少的氨基酸是組氨酸(1.2%)、半膀胺酸(1.5%)、脯氨酸(1.8%);帶負(fù)電荷的氨基酸殘基總數(shù)(Asp+Glu):53。帶正電荷的氨基酸殘基(Arg+Lys)總數(shù):53。ANXA2蛋白在哺乳動(dòng)物網(wǎng)狀細(xì)胞(體外)的半衰期為30 h,;酵母體內(nèi)小于20 h;體內(nèi)大腸桿菌小于10 h;不穩(wěn)定指數(shù)(II)計(jì)算為33.61,這說(shuō)明蛋白質(zhì)是穩(wěn)定的。3.3.2 雞ANXA2蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雞膜聯(lián)蛋白A2在DF-1細(xì)胞中的表達(dá)及亞細(xì)胞定位[J]. 龍耀,郭徵力,陳純露,鄧珊珊,熊建民,袁超,高洪波,段志強(qiáng).  中國(guó)家禽. 2019(08)
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碩士論文
[1]雞ANXA2基因在卵泡發(fā)育中的表達(dá)及調(diào)控研究[D]. 陳欣.曲阜師范大學(xué) 2015
[2]Annexin A2蛋白單克隆抗體制備及其時(shí)間分辨熒光免疫分析方法的初步建立[D]. 尹江麗.南方醫(yī)科大學(xué) 2014
[3]豬源膜聯(lián)蛋白A2的克隆、表達(dá)及其多克隆抗體的制備[D]. 陳江濤.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010



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