發(fā)布時間：2021-11-15 23:50

　　骨骼肌衛(wèi)星細胞（satellite cells，SCs）最早由Mauro在蛙脛前肌中發(fā)現(xiàn)，具有較強的自我更新、增殖和多向分化潛能，在體外培養(yǎng)條件下能跨胚層分化為多種細胞類型。魯西黃牛是世界上著名的肉用牛，已列入國家級畜禽遺傳資源重點保護品種名錄。本研究旨在建立魯西黃牛胚胎骨骼肌衛(wèi)星細胞體外擴增培養(yǎng)體系，并探索其低、中、高代次細胞增殖、分化等生物學特性，結(jié)論如下：（1）本研究選取魯西黃牛四肢骨骼肌，采用機械分離法、聯(lián)合酶消化法及差速貼壁法，成功分離獲得牛SCs，優(yōu)化了牛SCs體外擴增的最佳培養(yǎng)體系，并將牛SCs成功傳至23代，凍存后牛SCs仍具有較高的細胞活率。（2）免疫細胞化學染色檢測牛SCs標志物表達，結(jié)果顯示，P4、P9、P20代牛SCs均為Desmin、MyoD陽性表達；RT-PCR檢測牛SCs標志物表達，結(jié)果顯示P4、P9、P20代牛SCs均為Desmin、Pax7、c-Met、Myf5陽性表達，且灰度分析結(jié)果顯示，不同代次SCs同一標志物表達量差異不顯著，符合SCs標志物表達情況。（3）P4、P9、P20代牛SCs生長曲線均呈標準“S”型，分別經(jīng)歷了潛伏期，對數(shù)生長期和平臺期... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

Wnt信號通路Fig.1-1Wntsignalingpathways注：A:經(jīng)典Wnt信號通路；B：Ca2+依賴的非典型Wnt信號通路；C：JNK依賴的非典型Wnt信號通路

圖 2-1 原代培養(yǎng) SCs 形態(tài)Fig.2-1 Cellular morphology of primary cultured SCs分離獲得的細胞為圓形；B:差速培養(yǎng) 2h 后，貼壁的細胞為成纖維細胞，SCs 仍為懸浮的圓養(yǎng) 24h 后，貼壁的 SCs 形態(tài)；D:生長至約 80%的 SCs P0 代單層細胞形態(tài)。（40×）魯西黃牛 SCs 培養(yǎng)體系的優(yōu)化用 4 種不同的培養(yǎng)體系對原代牛 SCs 培養(yǎng)后，細胞表現(xiàn)出不同的增殖細胞處于生長潛伏期時，生長特性沒有明顯區(qū)別，但細胞進入生長殖能力出現(xiàn)顯著變化，在培養(yǎng)體系Ⅰ培養(yǎng)下，細胞增殖緩慢，在培養(yǎng)下，細胞增殖速度均較培養(yǎng)體系Ⅰ要快，但兩種體系對細胞增殖的，SCs 在培養(yǎng)體系Ⅳ的培養(yǎng)下，細胞增殖迅速，較其他三種體系更能增殖，是牛 SCs 在體外培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)體系。

30魯西黃牛胚胎骨骼肌衛(wèi)星細胞分離培養(yǎng)及生物學特性研究注：A-X:P0 代至 P23 代 SCs 形態(tài)；D-K: P3 代至 P10 代 SCs,胞體飽滿且折光性較強；L-Q: P11 代至 P16 代 SCs，仍具有較強的折光性；R: P17 代 SCs，折光性減弱，少數(shù)細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡；U：P20 代 SCs，出現(xiàn)明顯衰老現(xiàn)象，大量細胞出現(xiàn)空泡，細胞立體感減弱；X：P23 代 SCs，胞質(zhì)空泡明顯，細胞立體感消失，幾乎停止生長。（40×）2.3.4 魯西黃牛 SCs 凍存與復蘇牛 SCs 凍存前與復蘇后的細胞在形態(tài)上無明顯差異（如圖 2-4），但隨著細胞代次的增加，細胞的凍存活率逐漸降低（表 2-1）。方差分析結(jié)果表明，P4、P9 代 SCs凍存前后細胞活率差異顯著（0.01＜P＜0.05），表明細胞經(jīng)過凍存后凍存液會對細胞產(chǎn)生一定的損傷，但細胞代次低，細胞活力強，所以凍存液對細胞的損傷相對較��；而 P20 代 SCs 凍存前后細胞活率差異極顯著（P＜0.01），表明凍存過程對 P20 代 SCs的損傷較大。A1 B1 C1

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3497750