病毒共感染是自然界中普遍的現(xiàn)象,在共感染過程中病毒復(fù)制、細(xì)胞表型、病理變化、宿主范圍、組織嗜性和感染率等生物學(xué)特性都會(huì)發(fā)生變化。J亞群禽白血病病毒（ALV-J）,屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科,可引起免疫抑制、生長(zhǎng)遲緩和多種多樣的腫瘤。禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖�。≧eticuloendotheliosis,RE）,同樣屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科,指包括禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織増殖病病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）、脾壞死病毒（Spleen necrosis virus,SNV）、雞合胞體病毒（Chicken syncytial virus,CSV）和鴨傳染性貧血病毒（Duck infectious anemia virus,DIA）等多種網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）群的反轉(zhuǎn)錄病毒引起的一群病理綜合征,典型病癥為免疫抑制、矮小綜合癥和淋巴組織或其它組織形成的慢性腫瘤。在過去二十多年,我國(guó)大量流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告顯示ALV-J與REV的共感染普遍存在。除協(xié)同抑制抗體生成、促進(jìn)致病性增強(qiáng)外,ALV-J與REV共感染最主要的特征為引起致瘤譜... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：99 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
符號(hào)說(shuō)明
中文摘要
ABSTRACT
1.前言
    1.1 ALV-J與REV共感染的研究進(jìn)展
        1.1.1 ALV-J的研究進(jìn)展
        1.1.2 REV的研究進(jìn)展
            1.1.2.1 REV的致病性
        1.1.3 ALV-J與REV共感染的流行病學(xué)
        1.1.4 ALV-J與REV共感染的致病性
    1.2 病毒之間協(xié)同感染機(jī)制的研究進(jìn)展
    1.3 MIRNA在病毒感染中的作用
        1.3.1 miRNA的功能
        1.3.2 miRNA與病毒的關(guān)系
        1.3.3 miRNA對(duì)腫瘤形成的研究進(jìn)展
        1.3.4 miR-147對(duì)腫瘤形成的研究進(jìn)展
    1.4 NF-ΚB/KIAA1199/EGFR信號(hào)通路對(duì)腫瘤形成的研究進(jìn)展
        1.4.1 KIAA1199對(duì)腫瘤形成的研究進(jìn)展
        1.4.2 NF-κB與EGFR信號(hào)通路對(duì)腫瘤形成的研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的與意義
2.材料與方法
    2.1 主要試劑及耗材
    2.2 主要緩沖液
    2.3 主要儀器
    2.4 細(xì)胞及毒株
        2.4.1 CEF的制作
        2.4.2 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        2.4.3 細(xì)胞的接毒
        2.4.4 病毒TCID50的檢測(cè)
    2.5 ALV-J與REV共感染SPF雞模型的建立
        2.5.1 尿囊腔接種
        2.5.2 ALV-Jp27抗原的檢測(cè)
        2.5.3 REV抗原的檢測(cè)
        2.5.4 雞體重及免疫指數(shù)的測(cè)定
        2.5.5 組織病理學(xué)觀察
        2.5.6 組織內(nèi)ALV-J和REV病毒載量的測(cè)定
        2.5.7 組織內(nèi)KIAA1199的測(cè)定
        2.5.8 組織內(nèi)NF-κB活性的測(cè)定
        2.5.9 組織內(nèi)EGFR的測(cè)定
    2.6 ALV-J與REV共感染的ITRAQ質(zhì)譜定量分析
        2.6.1 iTRAQ肽段標(biāo)記
        2.6.2 肽段分級(jí)
        2.6.3 液相色譜(LC)-電噴霧電離(ESI)串聯(lián)存儲(chǔ)(MS/MS)質(zhì)譜分析(LC-MS/MS)
        2.6.4 序列數(shù)據(jù)庫(kù)查詢及數(shù)據(jù)分析
    2.7 ALV-J與REV共感染的MICRORNA表達(dá)譜分析
        2.7.1 RNA樣本檢測(cè)
        2.7.2 文庫(kù)構(gòu)建和上機(jī)測(cè)序
        2.7.3 microRNA信息分析
    2.8 負(fù)染電鏡觀察
    2.9 CCK-8對(duì)細(xì)胞增殖的檢測(cè)
    2.10 RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
    2.11 熒光定量PCR
    2.12 蛋白質(zhì)免疫印跡
    2.13 免疫組化
    2.14 統(tǒng)計(jì)分析
3.結(jié)果與分析
    3.1 ALV-J與REV共感染協(xié)同促進(jìn)病毒的復(fù)制和細(xì)胞的生存
        3.1.1 ALV-J與REV共感染協(xié)同促進(jìn)REV的復(fù)制
        3.1.2 ALV-J與REV共感染協(xié)同促進(jìn)ALV-Jgp85和REVenv蛋白的表達(dá)
        3.1.3 ALV-J與REV共感染協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞的生存
    3.2 ALV-J與REV共感染協(xié)同加劇病理變化并促進(jìn)腫瘤生成
        3.2.1 ALV-J與REV共感染引起雞胚非特異死亡
        3.2.2 ALV-J與REV共感染引起雞免疫抑制與生長(zhǎng)遲緩
        3.2.3 ALV-J與REV共感染在各組織器官中促進(jìn)病毒的復(fù)制
        3.2.4 ALV-J與REV共感染協(xié)同加劇病理變化
        3.2.5 ALV-J與REV共感染協(xié)同促進(jìn)腫瘤生成
    3.3 ALV-J與REV共感染協(xié)同激活新的原癌基因KIAA1199和抑制MIR-147的表達(dá)
        3.3.1 ALV-J與REV共感染的iTRAQ蛋白組學(xué)分析
        3.3.2 ALV-J與REV共感染的microRNA表達(dá)譜分析
        3.3.3 ALV-J與REV共感染協(xié)同激活KIAA1199的表達(dá)
        3.3.4 ALV-J與REV共感染協(xié)同抑制miR-147的表達(dá)
    3.4 MIR-147靶向調(diào)節(jié)KIAA1199的3’UTR區(qū)
    3.5 ALV-J與REV共感染通過促進(jìn)NF-ΚB和EGFR信號(hào)通路激活KIAA
        3.5.1 ALV-J與REV共感染協(xié)同上調(diào)NF-κB和EGFR相關(guān)蛋白
        3.5.2 在ALV-J與REV共感染過程中NF-κB、KIAA1199和EGFR這三者關(guān)系的驗(yàn)證
    3.6 MIR-147靶向調(diào)節(jié)的NF-ΚBP503’UTR區(qū)
    3.7 ALV-J與REV共感染協(xié)同激活KIAA1199和抑制MIR-147的分子機(jī)制圖
4.討論
    4.1 ALV-J與REV共感染協(xié)同促進(jìn)病毒復(fù)制與腫瘤生成
    4.2 MIR-147靶向NF-ΚBP50和KIAA1199的3’UTR區(qū)來(lái)調(diào)節(jié)KIAA
    4.3 ALV-J與REV共感染通過激活NF-ΚB/KIAA1199/EGFR信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)腫瘤生成
5.結(jié)論
6.參考文獻(xiàn)
7.致謝
8.攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文及專利情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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