為了獲得可用于實(shí)際生產(chǎn)檢測的抗混合系列蛋白激酶樣結(jié)構(gòu)域（MLKL）多克隆抗體,試驗(yàn)采用原核表達(dá)的方法進(jìn)行了MLKL蛋白的制備,又通過免疫小鼠獲得了抗MLKL的多克隆抗體,最后利用Western-blot檢測驗(yàn)證脂多糖（LPS）刺激豬小腸上皮細(xì)胞（IPEC-J2）中MLKL蛋白。結(jié)果表明:MLKL蛋白可以和制備的多克隆抗體發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。說明了制備的多克隆抗體具有良好的反應(yīng)原性,可以用于檢測。 

【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(13)北大核心

【文章頁數(shù)】：3 頁

【部分圖文】：

MLKL的PCR擴(kuò)增結(jié)果

將驗(yàn)證正確的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與pMD18-T Vector進(jìn)行連接,得到重組質(zhì)粒MLKL-pMD-18T Vector。將重組質(zhì)粒經(jīng)BamH1/Sal1限制性內(nèi)切酶雙酶切,目的堿基片段的大小為 1 434 bp,再將驗(yàn)證正確的目的堿基片段與pPROEX-HTa載體連接,構(gòu)建原核基因表達(dá)載體。雙酶切結(jié)果見圖2。2.3 MLKL蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的鑒定

將原核基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞BL21,經(jīng)終濃度為1.0 mmol/LIPTG誘導(dǎo)4 h后,取菌液進(jìn)行離心獲得沉淀。將沉淀用PBS懸浮后用SDS-PAGE上樣緩沖液處理蛋白質(zhì)樣品。將樣品通過SDS-PAGE電泳鑒定蛋白質(zhì)表達(dá)情況。結(jié)果顯示MLKL蛋白表達(dá)產(chǎn)物在55 ku左右出現(xiàn)條帶,與預(yù)期一致。結(jié)果見圖3。2.4 MLKL蛋白的表達(dá)純化

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]miR-200a-5p介導(dǎo)RNF11調(diào)控雞心肌缺硒性程序性壞死的研究[D]. 楊天殊.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018



本文編號：3496653