本實(shí)驗(yàn)用RACE、qPCR、Western Blot、基因克隆、測序、表達(dá)蛋白等方法,克隆了榮昌豬、長白豬FKBP5基因cDNA全長、構(gòu)建了FKBP5組織表達(dá)譜、表達(dá)純化了FKBP5蛋白,得到了如下結(jié)果：1、利用3’,5’末端快速擴(kuò)增法（Rapid Amplification of cDNA Ends techniques, RACE）從榮昌豬和長白豬胸腺組織中首次克隆出榮昌豬、長白豬FKBP5基因。榮昌豬FKBP5基因cDNA全長為4119 bp, CDS區(qū)長為1374 bp,編碼458個(gè)氨基酸的多肽,在5’端和3’端分別含有212bp和2533bp的非編碼區(qū)；長白豬FKBP5基因cDNA全長為4164bp, CDS區(qū)長為1374bp,編碼458個(gè)氨基酸的多肽,在5’端和3’端分別含有255bp和2535bp的非編碼區(qū)。2、運(yùn)用qPCR和Western Blot技術(shù)檢測了該基因在榮昌豬和長白豬不同組織中的mRNA和蛋白表達(dá)譜,并且分析了FKBP5 mRNA在榮昌豬和長白豬各組織中的表達(dá)差異。研究結(jié)果表明,在所檢測的組織中,心、肝、脾、肺、腎、胃、腦、肌肉、性腺、胸腺中均有FKBP5基... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 FKBPs家族概述
    1.2 FKBPs分子結(jié)構(gòu)和功能
        1.2.1 FKBPs分子結(jié)構(gòu)
        1.2.2 FKBPs功能
    1.3 FKBP5的分子結(jié)構(gòu)、組織分布與功能
        1.3.1 FKBP5的分子結(jié)構(gòu)
        1.3.2 FKBP5的組織分布
        1.3.3 FKBP5功能
2 研究的目的與意義
3 材料和方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 樣品采集
    3.2 主要儀器設(shè)備
    3.3 主要試劑盒
    3.4 主要試劑及酶
    3.5 載體、菌株和細(xì)胞
    3.6 實(shí)驗(yàn)室常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法及原理
        3.6.1 總RNA提取
        3.6.2 SMART-RACE-PCR技術(shù)
        3.6.3 PCR擴(kuò)增技術(shù)
        3.6.4 瓊脂糖電泳及膠回收
        3.6.5 目的片段連接與轉(zhuǎn)化
            3.6.5.1 目的片段與19 Simple T vector連接(TAKARA)
            3.6.5.2 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化及陽性克隆篩選
        3.6.6 基因序列分析
        3.6.7 RT-PCR及熒光定量PCR
        3.6.8 Western Blot(免疫印跡)技術(shù)
        3.6.9 FKBP5蛋白原核表達(dá)和純化
        3.6.10 FKBP5蛋白磷酸酶活性分析
4 結(jié)果與分析
    4.1 FKBP5基因的克隆，序列及序列同源性分析
        4.1.1 Total RNA質(zhì)量鑒定
        4.1.2 SMART cDNA的合成
        4.1.3 FKBP5基因的克隆,序列及序列同源性分析
    4.2 FKBP5基因組織表達(dá)譜
        4.2.1 FKBP5 mRNA組織表達(dá)譜
        4.2.2 榮昌豬、長白豬FKBP5基因表達(dá)差異
        4.2.3 FKBP5蛋白表達(dá)譜
    4.3 FKBP5蛋白原核表達(dá)
        4.3.1 FKBP5原核表達(dá)載體構(gòu)建
        4.3.2 FKBP5蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
        4.3.3 FKBP5蛋白鑒定
        4.3.4 誘導(dǎo)FKBP5蛋白表達(dá)誘導(dǎo)劑濃度、誘導(dǎo)時(shí)間
        4.3.5 FKBP5蛋白分離純化
        4.3.6 FKBP5蛋白磷酸酶活性分析
5 討論
    5.1 FKBP5基因的克隆，序列及序列同源性分析
    5.2 FKBP5基因組織表達(dá)譜
    5.3 FKBP5蛋白原核表達(dá)
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人Hexastatin基因的優(yōu)化、蛋白的表達(dá)純化及初步應(yīng)用[J]. 唐曉,宋娜玲,賀欣,王月英,劉謙,溫鐳,王德芝,韓英,張恒.  國際生物醫(yī)學(xué)工程雜志. 2012 (02)
[2]豬抗病育種候選基因研究進(jìn)展[J]. 袁樹楷,王金勇,謝和芳,李琴,白小青.  中國畜牧雜志. 2007(15)
[3]FKBPs的研究進(jìn)展[J]. 陳鵬,陳崇宏,程元榮.  海峽藥學(xué). 2004(03)
[4]半乳糖苷酶基因在大腸桿菌中過量表達(dá)及IPTG誘導(dǎo)條件[J]. 陳衛(wèi),葛佳佳,張灝,丁霄霖.  無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào). 2002(05)



本文編號(hào)：3496613