為了分離純化禽源致病性大腸埃希菌的噬菌體并測定其性質(zhì),將近4000份鴨糞樣品來源于安徽和縣某兩個(gè)規(guī)模化鴨場及南京某市場某鴨場的鴨糞樣品離心、過濾后提取上清液,采用點(diǎn)滴法和雙層瓊脂法對(duì)致病性大腸桿菌噬菌體進(jìn)行鑒定、純化并保存,結(jié)果共分離鑒定了136株大腸埃希菌烈性噬菌體,并對(duì)其中的四十余株進(jìn)行了生物特性學(xué)分析,包括透射電鏡觀察,宿主譜測定等,對(duì)其中的HX01,NJ01進(jìn)行了基因組提取并全基因組測序。以噬菌體NJ01為例,透射電鏡下結(jié)構(gòu)判定為短尾噬菌體科（Podoviridae）。宿主范圍較窄,僅能裂解被測大腸桿菌中的三株：DE172、NJ01和MC1061。效價(jià)為1.33×1013pfu/ml,（?）將純培養(yǎng)物稀釋至108PFU/mL,每隔15min（至4h）測其一步生長曲線,表明潛伏期為30min,平均裂解量為157PFU/cell,最佳感染復(fù)數(shù)為100。采用自己優(yōu)化改進(jìn)過噬菌體基因組提取和純化方法,制備了高質(zhì)量的烈性噬菌體HX01和NJ01的基因組,并通過第二代高通量測序技術(shù)進(jìn)行了全基因組測序,以NJ01為例,測序結(jié)果顯示：NJ01全基因組大小為77,448bp, G+C含量為42.... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 禽致病性大腸桿菌(病)研究概況
        參考文獻(xiàn)
    第二章 噬菌體研究情況概述
        1 噬菌體的分類及形態(tài)結(jié)構(gòu)
            1.1 噬菌體的生物學(xué)特性及分類概況
            1.2 有尾病毒目(Caudovirales)
        2 噬菌體的基因組學(xué)
        3 噬菌體的應(yīng)用
            3.1 細(xì)菌的鑒定和分型
            3.2 作為分子生物學(xué)研究的工具
        4 本文的研究意義及目的
        參考文獻(xiàn)
第二篇 實(shí)驗(yàn)研究
    第三章 烈性噬菌體的分離鑒定及生物特性學(xué)分析
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 噬菌體的生物特性學(xué)研究方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 噬菌體的分離及純化
            2.2 噬菌體透射電鏡下的形態(tài)觀察
            2.3 電鏡觀察
            2.4 宿主范圍測定
            2.5 噬菌體效價(jià)的測定
            2.6 噬菌體最佳感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection,MOI)的測定
            2.7 一步生長曲線
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第四章 噬菌體全基因組制備、測序及比較基因組分析
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 噬菌體基因組制備及測序
        2 結(jié)果與分析
            2.1 NJ01基因組測序結(jié)果及注釋
            2.2 核酸接收序列號(hào)
            2.3 NJ01的比較基因組學(xué)分析
            2.4 臨菌體旳進(jìn)化史探索
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第五章 全噬菌體蛋白樣品制備與二維電泳
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 全噬菌體蛋白樣品制備方法
            1.3 全噬菌體蛋白樣品二維電泳
        2 結(jié)果
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
        ABSTRACT
    第六章 烈性噬菌體NJ01治療禽源大腸桿菌感染的探索研究
        摘要
        1 材料
            1.1 樣品及試劑
            1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2 方法
            2.1 禽源大腸桿菌DE172的復(fù)壯
            2.2 DE172感染小鼠LD50的測定
            2.3 噬菌體療效探索
            2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 小鼠LD50的測定結(jié)果
            3.2 噬菌體NJ01療效測定結(jié)果
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
        Abstract
全文結(jié)論
致謝
已發(fā)表文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]ICTV第九次報(bào)告對(duì)病毒分類系統(tǒng)的一些修改[J]. 張忠信.  病毒學(xué)報(bào). 2012(05)
[2]噬菌體治療制劑的研究進(jìn)展[J]. 高成秀,嚴(yán)亞賢.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2007(07)
[3]致病性雞大腸桿菌噬菌體的分離與效價(jià)測定[J]. 孫海虹,馬同鎖,于珊,趙寶華.  河北師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(01)
[4]噬菌體治療細(xì)菌感染的研究[J]. 孫偉,朱春寶.  國外醫(yī)藥(抗生素分冊). 2005(02)
[5]油酸鈉與紫外線聯(lián)用滅活血漿中病毒的研究[J]. 劉蓉,沈德林,張文福,袁慶霞,鐘儒波.  中國消毒學(xué)雜志. 2001(04)



本文編號(hào)：3496273