催乳素（Prolactin,PRL）是由單基因編碼的多肽類激素,PRL不僅可以啟動(dòng)和維持哺乳動(dòng)物泌乳,還會(huì)影響雌性動(dòng)物卵巢發(fā)育和排卵,然而關(guān)于PRL對(duì)卵泡發(fā)育作用研究較少,PRL在綿羊卵泡發(fā)育過(guò)程中的作用機(jī)制未見(jiàn)報(bào)道。顆粒細(xì)胞作為卵泡的重要組成結(jié)構(gòu),除了可以支持卵泡生長(zhǎng)外,顆粒細(xì)胞分泌的激素還可以維持卵母細(xì)胞發(fā)育成熟,因此可以通過(guò)探究PRL對(duì)綿羊顆粒細(xì)胞功能的影響來(lái)闡明PRL在卵泡發(fā)育及閉鎖中的生物學(xué)功能。本試驗(yàn)以1歲左右小尾寒羊卵巢顆粒細(xì)胞為試驗(yàn)材料,通過(guò)外源添加不同濃度PRL培養(yǎng)顆粒細(xì)胞,利用CCK-8法測(cè)定顆粒細(xì)胞增殖、Annexin V-FITC/PI染色顆粒細(xì)胞、流式細(xì)胞儀檢測(cè)顆粒細(xì)胞凋亡、ELISA試劑盒檢測(cè)顆粒細(xì)胞培養(yǎng)液上清中雌激素（E2）和孕酮（P4）含量、qRT-PCR檢測(cè)顆粒細(xì)胞凋亡和激素分泌相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量等方法,以期研究PRL對(duì)綿羊卵巢顆粒細(xì)胞增殖凋亡和激素分泌的影響,闡明PRL調(diào)節(jié)綿羊卵泡發(fā)育機(jī)制,試驗(yàn)主要獲得以下研究結(jié)果:（1）在綿羊卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,分別加入不同濃度的PRL（0、0.05、0.5、5μg/mL）,連續(xù)培養(yǎng)顆粒細(xì)胞7d,每隔24h測(cè)... 

【文章來(lái)源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－３?ＰＲＬ處理后綿羊顆粒細(xì)胞的凋亡??Ｆｉｇ３－３?Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｗｉｔｈ?ＰＲＬ?ｏｎ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｉｎ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｓｈｅｅｐ?ｇｒａｎ?

ｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ??（Ｐ＜０．０５）?．?Ｉｎ?ｔｈｅ?ｓａｍｅ?ｃｏｌｕｍｎ，?ｖａｌｕｅｓ?ｗｉｔｈ?＊?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?（Ｐ＜０．０５?）??ｎｏ?＊?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ?ｗａｓ?ｎｏｔ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?Ｃ／＾０．０５）．??３．６綿羊顆粒細(xì)胞總ＲＮＡ質(zhì)量??綿羊顆粒細(xì)胞總ＲＮＡ經(jīng)核酸蛋白檢測(cè)儀檢測(cè)分析表明：ＯＤ２６０／２８０值為１．８？２．０；??１％瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果３條帶（圖３－４），３條帶從上到下分別為２８３『１＾八、１８３『１＾八??和５ＳｒＲＮＡ，表明綿羊顆粒細(xì)胞ＲＮＡ提取質(zhì)量較好，可以用于ＲＴ－ｑＰＣＲ試驗(yàn)。??５Ｓ??圖３－４顆粒細(xì)胞ＲＮＡ瓊脂糖膠電泳圖??Ｆｉｇ３－４?Ａｇａｒｏｓｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ?ｆｏｒ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｆｒｏｍ?ｓｈｅｅｐ?ｇｒａｎｕｌｏｓａ?ｃｅｌｌ??２０??

?催乳素對(duì)綿羊顆粒細(xì)胞的增殖與凋亡、激素分泌及相關(guān)基因表達(dá)的影響???３．７不同濃度ＰＲＬ對(duì)綿羊顆粒細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響??不同濃度ＰＲＬ（０、０．０５、０．５、５ｐｇ／ｍＬ）處理綿羊卵巢顆粒細(xì)胞２４ｈ后對(duì)５ｃ／－２、??５ａｘ、／？５３、Ｃａ＾ｍｓｅ－３ｍＲＮＡ相對(duì)表達(dá)量影響結(jié)果見(jiàn)圖３－５。由圖３－５可知，與對(duì)照??組相比，Ａ?組（０．０５?ｐｇ／ｍＬ）、Ｂ?組（０．５?ｐｇ／ｍＬ）和?Ｃ?組（５?｜ｉｇ／ｍＬ）?ＰＲＬ?處理顆粒??細(xì)胞后５ｃ／－２?ｍＲＮＡ相對(duì)表達(dá)量升高，其中Ｂ組和Ｃ組顯著高于對(duì)照組和Ａ組??（Ｐ＜０．０５），?Ｂ組和Ｃ組、Ａ組和對(duì)照組５ｄ－２?ｍＲＮＡ相對(duì)表達(dá)量差異不顯著（Ｐ＞０．０５）??（見(jiàn)圖３－５ａ）；?Ａ組ｍＲＮＡ相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組、Ｂ組和Ｃ組（Ｐ＜０．０５?），??Ｃ組Ｓｏｘ?ｍＲＮＡ相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（尸＜０．０５），Ｂ組與對(duì)照組、Ｃ組差異不??顯著（／＾＞０．０５）（見(jiàn)圖３－５ｂ）；?Ａ組／７５３?ｍＲＮＡ相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組、Ｂ組和??Ｃ組（尸＜０．０５），對(duì)照組、Ｂ組和Ｃ組之間差異不顯著（辦０．０５）（見(jiàn)圖３－５ｃ）；對(duì)照??組顆粒細(xì)胞Ｃ＇ａｓ／ｗｄ?ｍＲＮＡ相對(duì)表達(dá)量與各試驗(yàn)組之間差異不顯著（／＞＞０．０５）（見(jiàn)??圖?３－５ｄ）??３?ｂ??肖■?Ｄ！?２．５－ｉ?ｗ?ｘ??＾?ｃ??￡?〇?２?〇－?￥?＾?．?ｃ?ａｂ??ｂ?ｂ?１０?ｂ?ＪＬ?ａ??ｉｋｕ?ｉ：ｌｉｌｕ??０?０．０５?０．５?５?０?０．０５?０．５?５??ＰＲＬ濃度（ｊｊｑＭｉＬ｝?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ＰＲＬ濃度（｜ｊｇ／ｍＬ）?Ｃｏｎｃｅｎｔ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3494765