干擾素（interferon, IFN）是在病毒或干擾素誘生劑的作用下,由特定細胞所產(chǎn)生的,具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的一類高活性、多功能分泌性糖蛋白,是動物機體抵抗病毒入侵的第一道防線。通常將干擾素分為Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型干擾素,在眾多的干擾素類型中,以IFN-α的抗病毒活性最為顯著。研究發(fā)現(xiàn),體外表達的重組牛IFN-α （Bovine Interferon-a, BoIFN-a）對水泡性口炎病毒（VSV）、牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）、口蹄疫病毒（FMDV）和副流感病毒-3（PIV-3）等病毒的復(fù)制和增殖具有抑制作用。巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)是近年來發(fā)展最為迅速、應(yīng)用最為廣泛的外源蛋白表達系統(tǒng)之一,目前已利用該表達系統(tǒng)進行了多種動物干擾素的具活性表達。牛IFN-α多基因家族有10-12個亞型,目前已有其中8個亞型基因的克隆的相關(guān)報道,但尚無關(guān)于牛IFN-α多基因家族的系統(tǒng)研究及各個亞型的理化性質(zhì)與生物活性的具體研究。因此,關(guān)于牛IFN-α各亞型的系統(tǒng)性研究具有重要意義。本研究以本實驗室制備并保存的含有BoIFN-α1、 BoIFN-α7、BoIFN-α14（BoIFN-α1/7... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 干擾素概述
        1.1.1 干擾素的來源與發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 干擾素的分類
        1.1.3 干擾素的分子結(jié)構(gòu)
    1.2 牛干擾素α和重組牛干擾素α概述
        1.2.1 牛干擾素α的結(jié)構(gòu)特點
        1.2.2 牛干擾素α的生物學(xué)活性及作用機理
        1.2.3 重組牛干擾素α的研究進展
    1.3 利用巴斯德畢赤酵母表達外源蛋白的研究
        1.3.1 巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)簡介
        1.3.2 巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)的特點
        1.3.3 巴斯德畢赤酵母應(yīng)用于干擾素表達的研究
    1.4 研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 質(zhì)粒、載體、宿主菌、病毒
        2.1.2 細胞、培養(yǎng)基、血清
        2.1.3 酶、抗體、生化試劑
        2.1.4 主要儀器和設(shè)備
    2.2 試驗方法
        2.2.1 BoIFN-α1/7/14成熟肽基因的克隆及序列分析
        2.2.2 重組酵母表達載體pPICZαA-BoIFN-α1/7/14的構(gòu)建及鑒定
        2.2.3 重組酵母表達載體pPICZαA-BoIFN-α1/7/14轉(zhuǎn)化入畢赤酵母GS115
        2.2.4 重組酵母的鑒定
        2.2.5 陽性重組畢赤酵母的誘導(dǎo)表達與重組BoIFN-α1/7/14的初步純化
        2.2.6 重組BoIFN-α1/7/14的SDS-PAGE和Western blot分析
        2.2.7 重組BoIFN-α1/7/14理化性質(zhì)分析
        2.2.8 重組BoIFN-α1/7/14體外抗病毒活性分析
        2.2.9 重組BoIFN-α1/7/14抗增殖活性測定
        2.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
3 結(jié)果與分析
    3.1 BoIFN-α1/7/14成熟肽基因的PCR擴增
        3.1.1 BoIFN-α1/7/14成熟肽基因的PCR擴增
        3.1.2 重組質(zhì)粒pEASY-Blunt-Simple-BoIFN-α1/7/14的鑒定
        3.1.3 BoIFN-α1/7/14成熟肽基因的序列分析
    3.2 重組酵母表達載體的構(gòu)建及鑒定
    3.3 重組酵母的鑒定
    3.4 重組BoIFN-α1/7/14的SDS-PAGE和Western blot分析
    3.5 重組BoIFN-α1/7/14理化性質(zhì)分析
        3.5.1 重組BoIFN-α1/7/14胰酶敏感性分析
        3.5.2 重組BoIFN-α1/7/14 pH敏感性分析
        3.5.3 重組BoIFN-α1/7/14溫度敏感性分析
    3.6 重組BoIFN-α1/7/14體外抗病毒活性分析
        3.6.1 重組BoIFN-α1/7/14抗VSV活性測定
        3.6.2 重組BoIFN-α1/7/14抗病毒活性阻斷分析
        3.6.3 重組BoIFN-α1/7/14對IBRV的抗病毒效果
    3.7 重組BoIFN-α1/7/14抗增殖活性測定
4 討論
    4.1 關(guān)于牛干擾素α多基因家族及亞型劃分的研究
    4.2 BoIFN-α1/7/14成熟肽基因的PCR引物設(shè)計
    4.3 酵母表達蛋白的糖基化
    4.4 BoIFN-α1/7/14的理化性質(zhì)
    4.5 BoIFN-α1/7/14的抗病毒活性
    4.6 BoIFN-α1/7/14的抗增殖活性
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
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[7]牦牛IFN-α基因的克隆表達及抗病毒活性研究[J]. 蔡進忠,史喜菊,李少勇,韓雪,汪明.  中國獸醫(yī)雜志. 2006(10)
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本文編號：3493633