精原干細胞（Spermatogonial stem cells, SSCs）是雄性動物精子發(fā)生的基礎,并通過自我增殖和分化產(chǎn)生大量的精子,維持雄性動物終生生育能力。動物睪丸中SSCs數(shù)量極少,建立一個有效的體外培養(yǎng)系統(tǒng),使SSCs在體外大量增殖,以獲得足量的SSCs,再對其進行轉(zhuǎn)基因調(diào)控后,移植到供體動物體內(nèi)或體外分化的方式獲得通過減數(shù)分裂的精細胞或完整的精子,可為克隆動物、轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)及一些人類遺傳性疾病的基因治療提供新的途徑。山羊是一種經(jīng)濟適用且孕期短家畜,能用于生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因重組蛋白和多種有價值的產(chǎn)品。因此,研究山羊SSCs體外增殖和分化調(diào)控的影響因素可逐步建立山羊SSCs體外培養(yǎng)系統(tǒng),進而在生物醫(yī)學的研究、農(nóng)產(chǎn)品和生物制藥業(yè)上更具有重要的意義。為了逐步建立一個有效的山羊SSCs體外培養(yǎng)系統(tǒng),使SSCs在體外大量增殖,同時,為以后對山羊SSCs進行轉(zhuǎn)基因調(diào)控后,制作轉(zhuǎn)基因動物。本課題主要開展以下研究：（1）篩選合適日齡的山羊睪丸作為獲取山羊SSCs的材料,以合適日齡的山羊為獲得SSCs供體,篩選合適分離睪丸組織為細胞懸液的消化方法,再篩選的合適日齡和適當消化方法的基礎上,進而篩選合... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學安徽省

【文章頁數(shù)】：150 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

精原細胞分化棋型As,單個A型箱原細地，Apre成對的A里箱巨細胞，Ael,盛狀的A型箱碩細皿:to:中間型箱原細甩

安徽農(nóng)業(yè)大學?第一章山羊精原干細胞分離純化方法的建立??純化后睪丸細胞總量?９．６６?±?２．３１〇／〇、１０．９８?±?４．０３％、７．７１?±?２．４４〇／〇、１２．０４?±?３．２８〇／〇、１３．３４??±１．６９％，Ｗ抗體蟲化法所得的Ｔｈｙ－１＋細胞數(shù)最低，顯著低于其他各組（尸＜０．０５）；??ＢＳＡ＋層粘連蛋白聯(lián)合純化法所得Ｔｈｙ－１＋細胞數(shù)顯著高于明膠法、ＢＳＡ法（Ｐ＜化０５），??但明膠法和ＢＳＡ法之間Ｗ及層粘連蛋白和ＢＳＡ＋層粘連蛋白之間差異不顯著（ｆ＞??化０５），結(jié)果表明，ＢＳＡ＋層粘連蛋白聯(lián)合純化所得到的Ｔｈｙ－１＋陽性細胞數(shù)最多，是５??種方法里最合適的純化方法。??２．３．３細胞培養(yǎng)后克隆形態(tài)和ＡＫＰ染色??由圖１－１２可知，通過不同純化法得到的山羊睪丸ＳＳＣｓ體外培養(yǎng)１０?ｄ后，形成??典型的ＳＳＣｓ克隆，不同純化法所得到克隆形狀沒有變化，均為致密的邊緣不整齊的??集落狀，突出于睪丸體細胞向空間發(fā)展。進一步通過ＡＫＰ染色可知，不同純化法得??到的山羊睪丸ＳＳＣｓ體外培養(yǎng)后，克陰均表現(xiàn)為ＡＫＰ陽性（圖１－１２Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ和??Ｅ）。??

安徽農(nóng)此人學?巧一竄山羊梢原干細胞分該純化義讓的建立??化０５），但與明膠純化法、ＢＳＡ純化法相比，沒有顯著性差異存在（＾＞化０５）；明膠??純化法、ＢＳＡ純化法和掉粘連蛋白純化法呈組之間形成的平均克隆數(shù)差異不顯著（Ｐ??＞０．０５）。不同純化法所得到睪丸細胞懸液培養(yǎng)１０?ｄ后，所形成的ＳＳＣｓ平均克隆面??積分別為?７８３．７９?±?２０９．２２、８３６．２７?±?１８８．３４、７９６．４９?±?１６３．６６、８６７．３１?±?２１３．４４?和?８０６．８４??±２３３．１５?各組之間沒有顯著性差異（Ｐ＞〇．〇５）（圖１－１３８）。??Ｂ??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同溫度對體外培養(yǎng)精原細胞精子發(fā)生相關(guān)基因的影響[J]. 朱晶晶,王達利,李三華,鄧呈亮,孫廣峰.  中華男科學雜志. 2012(02)
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[4]STRA8表達作為出生后雄性生殖細胞特異性標志的應用研究現(xiàn)狀[J]. 盧夏英,楊蓓,徐斯凡,鄒挺.  中華男科學雜志. 2010(02)
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博士論文
[1]牛雄性生殖干細胞體外長期培養(yǎng)的研究[D]. 畢聰明.西北農(nóng)林科技大學 2007
[2]牛雄性生殖干細胞分離培養(yǎng)特性及移植研究[D]. 董武子.西北農(nóng)林科技大學 2006

碩士論文
[1]體外培養(yǎng)生精細胞的增殖分化效應及顯微授精研究[D]. 宋小敏.安徽醫(yī)科大學 2012
[2]奶山羊雄性生殖干細胞的分離培養(yǎng)及向精子細胞的誘導分化[D]. 朱海鯨.西北農(nóng)林科技大學 2011
[3]小鼠精原干細胞的分離培養(yǎng)及誘導分化[D]. 宋銳.安徽農(nóng)業(yè)大學 2010
[4]山羊精原細胞體外分離及培養(yǎng)分化與移植[D]. 楊延飛.西北農(nóng)林科技大學 2005



本文編號：3492679