發(fā)布時(shí)間：2021-11-12 23:53

　　本研究旨在了解豬流行性腹瀉病毒（PEDV）S2蛋白的抗原性,為下一步診斷試劑盒及亞單位疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。試驗(yàn)通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR的方法擴(kuò)增PEDV CH/GX/2015/750A株S2基因部分片段（S2A）,將其克隆后插入原核表達(dá)載體pET-32a（+）中,構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a-S2A。將原核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,Ni柱親和層析法純化重組蛋白,Western blotting檢測(cè)重組蛋白S2A的反應(yīng)原性。純化復(fù)性的重組蛋白S2A免疫昆明小鼠制備多克隆抗體,用間接ELISA法檢測(cè)獲得的多克隆抗體效價(jià),間接免疫熒光法驗(yàn)證制備的多克隆抗體的特異性。結(jié)果顯示,重組S2A蛋白在IPTG終濃度為0.2 mmol/L時(shí),37℃誘導(dǎo)表達(dá)3 h可獲得最高表達(dá)量,該重組蛋白主要以包涵體的形式存在;Western blotting結(jié)果顯示,純化復(fù)性后的重組蛋白S2A能夠與PEDV陽(yáng)性血清發(fā)生特異性結(jié)合,具有良好的反應(yīng)原性。制備的多克隆抗體效價(jià)可達(dá)1∶32 000,間接免疫熒光結(jié)果表明,制備的多克隆抗體能夠特異性識(shí)別和結(jié)合PEDV。結(jié)果表明,PEDV S2... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2020,47(06)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

IPTG誘導(dǎo)濃度優(yōu)化

誘導(dǎo)時(shí)間優(yōu)化

將以包涵體形式表達(dá)的帶His標(biāo)簽的重組S2A蛋白進(jìn)行純化,純化產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳分析,結(jié)果表明純化后獲得了較純的重組S2A蛋白(圖7)。圖2 pET32a-S2A的雙酶切鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
[1]豬流行性腹瀉病毒S蛋白抗原表位鑒定及受體結(jié)合域的初步篩選[D]. 孫東波.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2008



本文編號(hào)：3491888