發(fā)布時間：2021-11-12 14:49

　　為實(shí)現(xiàn)高效制備奶牛胎盤還原性多肽,選取身體健康、妊娠足月、自然分娩的中國荷斯坦奶牛新鮮胎盤,冰浴條件下勻漿化,采用超聲破碎法和胰蛋白酶酶解法制備奶牛胎盤多肽,探究不同勻漿濃度、超聲功率、酶底質(zhì)量比和處理時間對制備胎盤多肽收率和還原力的影響,并以響應(yīng)面法結(jié)合提取率與還原力對提取條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明:超聲破碎法在勻漿濃度50.00%,功率1 800W,破碎7.50min可獲得最佳提取率（0.95%）和VitC當(dāng)量（2.91μg/mg）;胰蛋白酶酶解法分別在反應(yīng)時間5.78和5.13h,勻漿濃度30.21%和35.59%,酶底質(zhì)量比3.24%和4.19%時,可得最高提取率（5.55%）和VitC當(dāng)量（39.32μg/mg）;提取率與還原力均呈顯著正相關(guān)（P<0.05）;經(jīng)響應(yīng)面優(yōu)化,奶牛胎盤還原性多肽最佳制備條件為:酶解時間5.8h,底物濃度34.98%,酶底質(zhì)量比3.33%,此時理論綜合提取率為2037.92μg/g。綜上,奶牛胎盤含有天然還原性多肽,超聲破碎法和胰蛋白酶酶解法均可應(yīng)用于提取奶牛胎盤還原性多肽,胰蛋白酶酶解法優(yōu)于超聲破碎法。 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,25(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：13 頁

【部分圖文】：

維生素C的普魯士藍(lán)法標(biāo)準(zhǔn)曲線

酶解結(jié)果的響應(yīng)面曲線見圖2：隨酶解時間延長，提取率提升速度隨之變緩，這說明奶牛胎盤組織幾乎被完全酶解（圖2(a））；隨底物濃度上升，同一反應(yīng)時間的提取率隨酶底比上升先上升后下降（圖2(b））；酶底比隨酶底比上升，同一反應(yīng)時間的提取率先上升后下降，但高酶底比組響應(yīng)值仍高于低酶底比組，這表明酶解反應(yīng)在試驗(yàn)區(qū)間內(nèi)某一值達(dá)到了飽和，并可能伴有胰蛋白酶的自身酶解現(xiàn)象（圖2(c））。以最大化提取率為目標(biāo)，獲取胰蛋白酶酶解奶牛胎盤理論最佳條件為：反應(yīng)時間5.78h，底物濃度30.21%，酶底質(zhì)量比3.24%，此時的理論提取率為5.55%。為驗(yàn)證模型有效性，以優(yōu)化結(jié)果進(jìn)行六次平行試驗(yàn)，實(shí)際試驗(yàn)條件為：反應(yīng)時間5.75h，底物濃度30.00%，酶底比3.00%，實(shí)測平均提取率為5.48%，與理論值接近且重復(fù)性較好，說明響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果可靠。

以綜合提取率（E）為響應(yīng)值，對胰蛋白酶酶解法制備胎盤還原性多肽條件進(jìn)一步優(yōu)化。結(jié)果如下：在A因素水平為-1,B因素水平為0,C因素水平為-1和1，及A因素為-1,C因素為0,B因素為-1和1時，響應(yīng)值分別為466.83、1 272.54、521.73和861.19μg/g,A因素為0,B因素為1,C因素為-1和1，及A因素為0,B因素為-1,C因素為-1和1時，響應(yīng)值分別為376.93、1 301.64、408.00和456.44μg/g；三因素均為0時，響應(yīng)值分別為1457.65、1 910.01、2 066.57、2 094.40和2 180.11μg/g;A因素為1,B因素為0,C因素為-1和1時，及C因素為0,B因素為-1和1時響應(yīng)值分別為1 394.89、1 317.27、578.00和1 612.63μg/g。建立回歸模型，所得二次響應(yīng)面回歸方程為：式中：A、B和C分別為1.3.3所編碼的時間、底物濃度和酶底比。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3491133