牛GV期卵母細(xì)胞相對于成熟卵母細(xì)胞的冷凍保存要困難很多,但在遠(yuǎn)距離運(yùn)輸卵母細(xì)胞時,必須進(jìn)行冷凍保存。因此,開發(fā)GV期卵母細(xì)胞冷凍保存技術(shù)對于充分利用未成熟卵母細(xì)胞、特別是遠(yuǎn)距離屠宰場卵巢卵母細(xì)胞保存具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。海藻糖（trehalose）是一種類似于蔗糖的非還原性雙糖,能形成玻璃狀保護(hù)層保護(hù)處于極端條件下的生命體,因此探索海藻糖作為非滲透性冷凍保護(hù)劑替代常規(guī)玻璃化冷凍保護(hù)劑（CPA）中蔗糖、用于冷凍保存GV期卵母細(xì)胞的可能性,并找到最適替代濃度是本研究的目的之一。有研究證明,常規(guī)溶解冷凍保護(hù)劑的緩沖介質(zhì)DPBS（杜氏磷酸鹽緩沖液）中的主要成分NaCl,對胚胎的超低溫冷凍具有一定的危害,但其對卵母細(xì)胞尤其是GV期卵母細(xì)胞的保護(hù)作用未見報(bào)道。因此,本研究的目的之二,是以氯化膽堿代替NaCl,以及聯(lián)合海藻糖和氯化膽堿用于GV期卵母細(xì)胞的冷凍保存,探索其保護(hù)效果。此外,本研究的目的之三,是研究冷凍損傷的機(jī)制,凋亡基因和周期基因相對表達(dá)量的差異性。研究內(nèi)容和結(jié)果如下：1.不同濃度海藻糖對牛GV期卵母細(xì)胞玻璃化冷凍的效果（1）在對不同濃度海藻糖作為非滲透性保護(hù)劑對卵母細(xì)胞存活能力評價(jià)的實(shí)驗(yàn)... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
文獻(xiàn)綜述
    1 牛卵母細(xì)胞冷凍保存研究進(jìn)展
        1.1 牛卵母細(xì)胞冷凍保存研究現(xiàn)狀
        1.2 卵母細(xì)胞冷凍保存的技術(shù)方法
        1.3 玻璃化冷凍保存研究進(jìn)展
        1.4 冷凍保護(hù)劑
    2 海藻糖在卵母細(xì)胞玻璃化冷凍中的應(yīng)用
        2.1 海藻糖的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)
        2.2 海藻糖在哺乳動物卵母細(xì)胞玻璃化冷凍中的應(yīng)用
    3 氯化膽堿在胚胎或卵母細(xì)胞冷凍中的應(yīng)用及優(yōu)勢
        3.1 氯化膽堿在胚胎和配子冷凍中的應(yīng)用
        3.2 卵母細(xì)胞冷凍液母液中氯化膽堿替代氯化鈉的優(yōu)勢原因
    4 玻璃化冷凍對卵母細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞器和發(fā)育潛力的影響
        4.1 玻璃化冷凍對卵母細(xì)胞細(xì)胞骨架及染色體的影響
        4.2 玻璃化冷凍對卵母細(xì)胞細(xì)胞膜的影響
        4.3 玻璃化冷凍對卵母細(xì)胞透明帶的影響
        4.4 玻璃化冷凍對卵母細(xì)胞線粒體的影響
        4.5 玻璃化冷凍對卵母細(xì)胞的分子損傷的影響
    5 本實(shí)驗(yàn)的研究目的及意義
第一章 不同濃度海藻糖對牛GV期卵母細(xì)胞冷凍的效果
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 方法
        2.3 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 冷凍對卵母細(xì)胞存活能力的影響
        3.2 冷凍對卵母細(xì)胞透明帶的影響
        3.3 冷凍對卵母細(xì)胞細(xì)胞器的影響
        3.4 冷凍對卵丘細(xì)胞擴(kuò)展的影響
        3.5 冷凍對卵母細(xì)胞發(fā)育潛力的影響
    4 討論
        4.1 卵母細(xì)胞存活能力的評價(jià)
        4.2 卵母細(xì)胞凍存后透明帶硬度的評價(jià)
        4.3 卵母細(xì)胞凍存后細(xì)胞器的評價(jià)
        4.4 卵母細(xì)胞凍融后卵丘擴(kuò)展和發(fā)育能力的評價(jià)
    5 小結(jié)
第二章 牛GV期卵母細(xì)胞冷凍損傷的分子機(jī)制
    1 前言
    2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 結(jié)果與分析
        3.1 冷凍對卵母細(xì)胞凋亡的影響
        3.2 冷凍對卵母細(xì)胞凋亡和周期基因mRNA表達(dá)量的影響
    4 討論
    5 小結(jié)
第三章 改良磷酸鹽緩沖液(mPBS)配制玻璃化冷凍液冷凍卵母細(xì)胞效果評價(jià)
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
        2.2 方法
    3 結(jié)果與分析
        3.1 以mPBS配制玻璃化冷凍保護(hù)劑,冷凍對卵母細(xì)胞存活能力的影響
        3.2 以mPBS配制玻璃化冷凍保護(hù)劑,冷凍對卵母細(xì)胞透明帶硬度的影響
        3.3 以mPBS配制玻璃化冷凍保護(hù)劑,冷凍對卵母細(xì)胞發(fā)育潛力的影響
        3.4 以mPBS配制玻璃化冷凍保護(hù)劑,冷凍對卵母細(xì)胞凋亡和周期基因mRNA表達(dá)量的影響
    4 討論
        4.1 卵母細(xì)胞凍融后活力評價(jià)
        4.2 卵母細(xì)胞凍融后透明帶硬度評價(jià)
        4.3 卵母細(xì)胞凍融后發(fā)育能力的評價(jià)
        4.4 卵母細(xì)胞凍融后細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期基因mRNA表達(dá)量評價(jià)
    5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3490390