奶牛是我國(guó)重要的產(chǎn)乳經(jīng)濟(jì)動(dòng)物之一,奶牛乳腺泌乳功能會(huì)影響乳產(chǎn)量和乳蛋白的含量。蛋白質(zhì)組學(xué)中一個(gè)重要的研究部分是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,而其中以磷酸化修飾最普遍、最重要,參與生命活動(dòng)的整個(gè)過(guò)程。有些蛋白可以通過(guò)磷酸化和去磷酸化,調(diào)節(jié)乳蛋白、乳脂等的合成,例如mTOR和STAT5。但有關(guān)于這方面的研究很少,具體機(jī)制尚不清楚。本研究利用蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析手段,鑒定了DCMECs細(xì)胞核中的磷酸化蛋白質(zhì),通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)功能和磷酸化位點(diǎn)的分析,可以對(duì)磷酸化蛋白是如何影響乳合成的分子機(jī)制有更進(jìn)一步的了解。并由已知的生物學(xué)手段,驗(yàn)證部分獲得的蛋白,結(jié)果證明這些蛋白確實(shí)對(duì)泌乳過(guò)程有影響。為從蛋白質(zhì)組角度研究奶牛泌乳調(diào)控的方法提供了理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)分為二個(gè)部分：一、通過(guò)培養(yǎng)體外奶牛乳腺上皮細(xì)胞系,提取奶牛乳腺上皮細(xì)胞核蛋白,用質(zhì)譜技術(shù)鑒定細(xì)胞核中蛋白質(zhì)和磷酸化蛋白質(zhì),利用iniprot_Bos_taurus.fasta數(shù)據(jù)庫(kù),匹配有意義的蛋白質(zhì)（Total score>65, P<0.05）,檢測(cè)到細(xì)胞核中蛋白664個(gè)、磷酸化蛋白658個(gè),并得到了600個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中... 

【文章來(lái)源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 奶牛泌乳生物學(xué)研究進(jìn)展
        1.1.1 奶牛乳腺基本結(jié)構(gòu)的簡(jiǎn)述
        1.1.2 奶牛泌乳的基本機(jī)理
    1.2 奶牛泌乳信號(hào)通路及功能基因篩選
        1.2.1 奶牛泌乳信號(hào)通路
        1.2.2 奶牛泌乳功能基因篩選
    1.3 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究進(jìn)展
        1.3.1 蛋白質(zhì)組研究技術(shù)
        1.3.2 細(xì)胞核蛋白組學(xué)技術(shù)的研究進(jìn)展
        1.3.3 磷酸化蛋白質(zhì)組研究進(jìn)展
        1.3.4 質(zhì)譜技術(shù)在翻譯后修飾蛋白質(zhì)組學(xué)中的研究應(yīng)用
    1.4 本研究的目的以及意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與設(shè)備
        2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 奶牛乳腺上皮細(xì)胞系的建立以及鑒定
        2.2.2 奶牛乳腺上皮細(xì)胞細(xì)胞核磷酸化蛋白質(zhì)的提取、純化及鑒定
        2.2.3 奶牛乳腺上皮細(xì)胞細(xì)胞核磷蛋白質(zhì)的質(zhì)譜鑒定
        2.2.4 建立蛋氨酸對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞泌乳相關(guān)信號(hào)分子影響模型
        2.2.5 奶牛乳腺上皮細(xì)胞細(xì)胞核磷酸化蛋白質(zhì)組中差異表達(dá)的泌乳相關(guān)信號(hào)分子的驗(yàn)證
    2.3 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 DCMECs的培養(yǎng)、鑒定及細(xì)胞核蛋白鑒定結(jié)果
    3.2 DCMECS細(xì)胞核磷酸化蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定結(jié)果
    3.3 蛋氨酸對(duì)DCMECS泌乳相關(guān)信號(hào)分子影響結(jié)果驗(yàn)證
    3.4 篩選出來(lái)的DCMECs細(xì)胞核磷酸化蛋白質(zhì)組中相關(guān)信號(hào)分子的驗(yàn)證結(jié)果
4 討論
    4.1 DCMECs的培養(yǎng)、驗(yàn)證及蛋氨酸對(duì)DCMECS泌乳能力的影響
    4.2 細(xì)胞核磷酸化蛋白質(zhì)譜結(jié)果分析
        4.2.1 細(xì)胞核磷酸化蛋白提取
        4.2.2 質(zhì)譜鑒定結(jié)果生物信息學(xué)分析
    4.3 DCMECS細(xì)胞核磷酸化蛋白質(zhì)組中泌乳相關(guān)蛋白的驗(yàn)證
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鈣聯(lián)蛋白調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡[J]. 李愛(ài)玲,修瑞娟.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2011(03)
[2]健康奶牛與臨床型乳腺炎奶牛乳腺核蛋白組差異表達(dá)分析[J]. 王建鋒,趙興緒,張勇,徐鐵山.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2010(01)
[3]mTOR/S6K1信號(hào)通路研究進(jìn)展[J]. 劉效磊,牛燕媚,傅力.  中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志. 2010(01)
[4]BEP2D細(xì)胞受照前后蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J]. 薛振偉,周小林,谷娟娟,蘧艷峰,崔梅萍.  輻射防護(hù). 2009(04)
[5]奶牛乳腺上皮細(xì)胞系的建立[J]. 陳建暉,佟慧麗,李慶章,高學(xué)軍.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(05)
[6]羥基喜樹(shù)堿誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡前后細(xì)胞核蛋白質(zhì)組變化的定量分析[J]. 顏玉蓉,付玉榮,邱宗蔭.  分子細(xì)胞生物學(xué)報(bào). 2008(02)
[7]牛乳腺上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其生物學(xué)特性[J]. 多曙光,吳應(yīng)積,羅奮華,旭日干.  動(dòng)物學(xué)研究. 2006(03)
[8]過(guò)瘤胃蛋氨酸對(duì)奶牛產(chǎn)奶量以及乳成分的影響[J]. 韓兆玉,周巖民,王根林,劉永剛.  畜牧與獸醫(yī). 2005(05)

博士論文
[1]MAPK1和eEF1B對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞泌乳調(diào)控作用及機(jī)理研究[D]. 陸黎敏.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]奶牛乳腺上皮細(xì)胞JAK2-STAT5和mTOR信號(hào)通路協(xié)同調(diào)控乳蛋白合成[D]. 史琳琳.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3490100