豬流行性腹瀉（porcine epidemicdiarrhea, PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的一種以腹瀉、嘔吐和脫水為主要特征的豬腸道傳染病。該病1971年首次在英國(guó)被發(fā)現(xiàn),隨后,其它歐洲國(guó)家和部分亞洲國(guó)家相繼報(bào)道了該病的發(fā)生與流行。以前,美國(guó)從未出現(xiàn)PEDV,但從2013年5月以來,美國(guó)多個(gè)州發(fā)生PEDV的流行,引起了美國(guó)乃至全球養(yǎng)豬業(yè)的高度重視。我國(guó)是上世紀(jì)80年代初首次發(fā)生PEDV。由于該病對(duì)新生仔豬的感染率和致死率均很高,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2010年冬季以來,流行性腹瀉在我國(guó)10多個(gè)省市暴發(fā)并呈現(xiàn)新的流行特征：發(fā)病率和致死率高、流行廣、損失大,而且以前接種過豬流行性腹瀉疫苗的豬也未能幸免,提示該流行毒株毒力較強(qiáng),而且可能與現(xiàn)有疫苗毒株存在較大的差異,導(dǎo)致現(xiàn)有疫苗難以提供免疫保護(hù)。有意義的是,美國(guó)2013年流行的PEDV在基因組水平上與我國(guó)流行的PEDV同源性高達(dá)99.5%,稱為中國(guó)變異株。針對(duì)當(dāng)前流行的豬流行性腹瀉病毒,本研究開展了檢測(cè)方法的建立、病毒的分離與鑒定,同時(shí),對(duì)流行毒株的遺傳進(jìn)化特征進(jìn)行了深入研究。主要研究?jī)?nèi)容如下：1. PEDV RT... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬流行性腹瀉
    1.2 PEDV的流行病學(xué)特點(diǎn)
        1.2.1 宿主因素
        1.2.2 病毒因素
        1.2.3 疫苗因素
        1.2.4 飼養(yǎng)管理與環(huán)境因素
    1.3 PEDV的流行病學(xué)
    1.4 PEDV的分子結(jié)構(gòu)和遺傳特征
        1.4.0 PEDV的分子結(jié)構(gòu)
        1.4.1 5’UTR
        1.4.2 ORF1
        1.4.3 S蛋白
        1.4.4 ORF3
        1.4.5 M蛋白
        1.4.6 E蛋白
        1.4.7 N蛋白
        1.4.8 3’UTR
        1.4.9 PEDV的分子流行病學(xué)研究進(jìn)展
    1.5 PEDV的檢測(cè)方法
    1.6 PEDV疫苗的研究
        1.6.1 滅活疫苗
        1.6.2 弱毒疫苗
        1.6.3 基因工程疫苗
        1.6.4 核酸疫苗
        1.6.5 轉(zhuǎn)基因植物疫苗
    1.7 PEDV的臨床治療
    1.8 姜黃素與抗病毒
第2章 研究目的與意義
第3章 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 病料及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 細(xì)胞與菌株
        3.1.3 載體與質(zhì)粒
        3.1.4 工具酶及主要試劑
        3.1.5 培養(yǎng)基與抗生素及其配制
        3.1.6 主要緩沖液與相關(guān)試劑及其配制
        3.1.7 分子生物學(xué)分析軟件
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 病料采集與處理
        3.2.2 病毒的分離
        3.2.3 PEDV的增殖
        3.2.4 限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)
        3.2.5 PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物的電泳檢測(cè)
        3.2.6 PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物回收與純化
        3.2.7 外源DNA片段與質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)
        3.2.8 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備(氯化鈣法)
        3.2.9 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        3.2.10 質(zhì)粒的制備與鑒定
        3.2.11 病毒粒子的電鏡觀察
        3.2.12 病毒滴度的測(cè)定
        3.2.13 樣品總RNA的提取及cDNA的合成
        3.2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測(cè)方法的建立及流行病學(xué)調(diào)查
        4.1.1 豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測(cè)方法的建立
        4.1.2 豬流行性腹瀉病毒流行病學(xué)調(diào)查
    4.2 豬流行性腹瀉病毒的分離與鑒定
        4.2.1 病毒的分離
        4.2.2 PEDV AJ1102株病毒毒價(jià)的測(cè)定
        4.2.3 PEDV AJ1102株病毒形態(tài)的電鏡觀察結(jié)果
        4.2.4 間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)(IFA)
        4.2.5 病毒的RT-PCR檢測(cè)
    4.3 PEDV AJ1102株的全基因組序列的測(cè)定與進(jìn)化分析
        4.3.1 PEDV AJ1102株基因片段的RT-PCR擴(kuò)增
        4.3.2 PEDV AJ1102株各擴(kuò)增片段的測(cè)序及序列拼接
        4.3.3 PEDV AJ1102株全基因組序列的遺傳進(jìn)化分析
        4.3.4 PEDV AJ1102株5’UTR的結(jié)構(gòu)分析
        4.3.6 PEDV AJ1102株3’UTR的結(jié)構(gòu)分析
        4.3.7 PEDV AJ1102株S蛋白的遺傳進(jìn)化分析
        4.3.8 PEDV AJ1102株M蛋白的遺傳進(jìn)化分析
        4.3.9 PEDV AJ1102株N蛋白的遺傳進(jìn)化分析
        4.3.10 PEDV AJ1102株ORF3的遺傳進(jìn)化分析
        4.3.11 PEDV AJ1102株E蛋白的遺傳進(jìn)化分析
        4.3.12 PEDV AJ1102株全基因組的同源重組分析
    4.4 PEDV流行毒株的遺傳標(biāo)志分析
    4.5 中藥姜黃素抗PEDV增殖的分析
        4.5.1 姜黃素對(duì)Vero細(xì)胞的毒性試驗(yàn)
        4.5.2 姜黃素抗PEDV增殖的分析
第5章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 PEDV RT-PCR檢測(cè)方法的建立
        5.1.2 PEDV的流行病學(xué)調(diào)查及AJ1102株的分離鑒定
        5.1.3 PEDV AJ102株全基因組序列和S、M、N、ORF3基因序列分析
        5.1.4 PEDV AJ1102株的致病性分析
        5.1.5 PEDV的毒力相關(guān)基因
        5.1.6 中藥姜黃素抗PEDV增殖的分析
    5.2 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬流行性腹瀉病毒核衣殼蛋白與感染細(xì)胞核磷蛋白的共定位分析[J]. 呂茂杰,陳建飛,時(shí)洪艷,陳小金,范秀萍,申識(shí)川,馮力.  微生物學(xué)報(bào). 2011(05)
[2]豬流行性腹瀉病毒S蛋白受體結(jié)合域的分析[J]. 孫東波,陳建飛,時(shí)洪艷,申識(shí)川,呂茂杰,范秀萍,陳洪巖,馮力.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2009(04)
[3]豬流行性腹瀉病毒纖突蛋白基因克隆與序列分析[J]. 李建強(qiáng),柳紀(jì)省,蘭喜,程杰,楊敏,吳潤(rùn),殷相平,李寶玉,李學(xué)瑞,楊彬.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2007(04)
[4]豬流行性腹瀉病毒的分離培養(yǎng)與鑒定[J]. 錢永清,聞人楚,唐永蘭,孫智鋒.  上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 1999(02)
[5]豬流行性腹瀉弱毒株的培育[J]. 佟有恩,馮力,李偉杰,王明,馬思奇.  中國(guó)畜禽傳染病. 1998(06)
[6]豬傳染性胃腸炎與豬流行性腹瀉二聯(lián)氫氧化鋁細(xì)胞滅活疫苗的研究[J]. 馬思奇,王明,馮力,李偉杰.  中國(guó)畜禽傳染病. 1995(06)
[7]豬流行性腹瀉病毒適應(yīng)Vero細(xì)胞培養(yǎng)及以傳代細(xì)胞毒制備氫氧化鋁滅活疫苗免疫效力試驗(yàn)[J]. 馬思奇,王明,周金法,馮力.  中國(guó)畜禽傳染病. 1994(02)
[8]豬流行性腹瀉滅活疫苗的研究[J]. 王明,馬思奇,周金法,于文濤,魏風(fēng)祥,崔現(xiàn)蘭,馮力,佟有恩,黃紹棠,劉長(zhǎng)明.  中國(guó)畜禽傳染病. 1993(05)
[9]豬流行性腹瀉病毒實(shí)驗(yàn)感染豬排毒規(guī)律的研究[J]. 王新平,朱維正.  獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 1988(01)
[10]應(yīng)用豬胎腸單層細(xì)胞培養(yǎng)豬流行性腹瀉病毒的研究[J]. 宣華,邢德坤,王殿瀛,朱維正,趙鳳玉,鞏懷俊,費(fèi)思閣.  獸醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 1984(03)

博士論文
[1]豬流行性腹瀉病毒全基因組序列分析及感染性cDNA克隆的構(gòu)建[D]. 陳建飛.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012

碩士論文
[1]豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉二聯(lián)核酸疫苗免疫效力研究[D]. 孟凡丹.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3489353