雞白痢是由雞白痢沙門菌引起的一種嚴(yán)重危害家禽生產(chǎn)的可經(jīng)垂直傳播的傳染病�！秶抑虚L期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》將其確定為優(yōu)先防治病種,對(duì)種雞群提出凈化要求。在我國及其他發(fā)展中國家,常采用藥物預(yù)防和控制該病,雖有一定的效果,但不能達(dá)到清除病原的目的,且長期使用抗生素會(huì)產(chǎn)生多重耐藥性和藥物殘留等問題。疫苗免疫是防控該病的有效措施之一,常用疫苗為沙門菌減毒活疫苗。全血玻片凝集試驗(yàn)是養(yǎng)殖場檢疫和淘汰陽性雞的常用方法,但正常情況下無法區(qū)別自然感染動(dòng)物和免疫動(dòng)物（Differentiation of Infected and Vaccinated Animals,DIVA）,因此研制具有 DIVA 特性的疫苗對(duì)種群的凈化具有積極作用。雞白痢沙門菌LPS合成相關(guān)基因缺失株S6702△rfaL和S6702△rfaG由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建,具有致病力低、免疫原性高和DIVA等特性。生物被膜作為雞白痢沙門菌對(duì)抗不良環(huán)境而形成的結(jié)構(gòu)性細(xì)菌群落,可導(dǎo)致持續(xù)感染。為了進(jìn)一步降低沙門菌的致病力、提高其安全性,本研究利用λ-Red同源重組技術(shù)在LPS合成相關(guān)基因缺失株的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步構(gòu)建雞白痢沙門菌生物被膜... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

6702ArfaGACagA構(gòu)建策略Fig.l-1Thesimpleoftargetgene:咖GandesgAgenedisnaptionstrategy

３．３．２生物被膜形成能力測定??結(jié)晶紫染色定量法測定生物被膜的形成能力，經(jīng)０．４％的結(jié)晶紫染色２０ｍｉｎ，肉眼觀察??單缺失株與野生株無差異，雙基因缺失株和三基因缺失株均無生物被膜形成能力（圖１－７??Ａ）。用新鮮的溶解液溶解后測定〇Ｄ５５〇值，野生株Ｓ６７０２的ＯＤ５５〇值為０．５６９?±?０，０３２，??陰對(duì)照ＯＤ５５〇的值為０．１２５?±０．０１２。與野生株相比，Ｓ６７０２Ａｒ／ａＬ生物形成能力顯著減低??（尸＜０．０５）；?Ｓ６７０２Ａｒ／〇Ｇ的生物膜形成能力無顯著性差異（Ｐ＞０．０５）；雙基因缺失株??Ｓ６７０２Ａ吻ＺＡｃｙｇ／４、和三基因缺失株?、??Ｓ６７０２Ａｒ／ａＧＡｃ艱４Ａｏ—ｉ？的生物被膜形成能力極顯著降低（Ｐ＜０．０１）（圖１－７Ｂ）。??（Ａ）??△挪?ＡｒｆｕＧ??Ａ?Ａｒｆｉｉｌ?ＡｃｓｇＡ?Ａｒｆｕ６＇?ＡｃｓｇＡ??Ｂｌａｎｋ?Ｓ６７０２?Ａｒ／ａＬ?Ａ〇ｍｐＲ?Ｂｌａｎｋ?Ｓ６７０２?Ａｒ／，Ｇ?＾?Ａ〇ｍｐＲ??

０１２３４５６７８９?１０?１１?１２??Ｔｉｍｅ／ｈ??圖１－６．野生株及其缺失株生長曲線??Ｆｉｇ．?１－６?Ｇｒｏｗｔｈ?ｃｕｒｖｅｓ?ｏｆ?ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ?ａｎｄ?ｍｕｔａｎｔｓ??３．３．２生物被膜形成能力測定??結(jié)晶紫染色定量法測定生物被膜的形成能力，經(jīng)０．４％的結(jié)晶紫染色２０ｍｉｎ，肉眼觀察??單缺失株與野生株無差異，雙基因缺失株和三基因缺失株均無生物被膜形成能力（圖１－７??Ａ）。用新鮮的溶解液溶解后測定〇Ｄ５５〇值，野生株Ｓ６７０２的ＯＤ５５〇值為０．５６９?±?０，０３２，??陰對(duì)照ＯＤ５５〇的值為０．１２５?±０．０１２。與野生株相比，Ｓ６７０２Ａｒ／ａＬ生物形成能力顯著減低??（尸＜０．０５）；?Ｓ６７０２Ａｒ／〇Ｇ的生物膜形成能力無顯著性差異（Ｐ＞０．０５）；雙基因缺失株??Ｓ６７０２Ａ吻ＺＡｃｙｇ／４、和三基因缺失株?、??Ｓ６７０２Ａｒ／ａＧＡｃ艱４Ａｏ—ｉ？的生物被膜形成能力極顯著降低（Ｐ＜０．０１）（圖１－７Ｂ）。??（Ａ）??△挪?ＡｒｆｕＧ??Ａ?Ａｒｆｉｉｌ?ＡｃｓｇＡ?Ａｒｆｕ６＇?ＡｃｓｇＡ??Ｂｌａｎｋ?Ｓ６７０２?Ａｒ／ａＬ?Ａ〇ｍｐＲ?Ｂｌａｎｋ?Ｓ６７０２?Ａｒ／，Ｇ?＾?Ａ〇ｍｐＲ??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]攜帶NDV HN基因疫苗的重組減毒雞白痢沙門菌口服免疫原性研究[J]. 丁軻,余祖華,李蒙,郁川,尚珂,程相朝,陳桂華,廖成水,賈艷艷,汪洋,張春杰.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2016(10)
[2]細(xì)菌生物膜的結(jié)構(gòu)及形成機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 祝司霞.  沈陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2015(02)
[3]肉雞產(chǎn)業(yè)鏈中沙門菌流行情況及其耐藥性[J]. 謝懋英,賴婧,馬立才,吳聰明,左之才.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(11)
[4]細(xì)菌生物膜的基本特性研究進(jìn)展[J]. 祝司霞.  科技視界. 2014(30)
[5]禽沙門菌疫苗的免疫保護(hù)機(jī)制研究進(jìn)展[J]. Liliana Revolledo,鐘蕾.  中國家禽. 2013(02)
[6]天然外膜蛋白A對(duì)雞腸炎沙門菌無保護(hù)作用[J]. 朱靜.  中國家禽. 2012(20)
[7]減毒雞白痢沙門氏菌ΔcrpC79-13株的構(gòu)建及其對(duì)雛雞的免疫活性[J]. 程相朝,郁川,廖成水,趙戰(zhàn)勤,張春杰,李銀聚,吳庭才,李小康,李正.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2012(01)
[8]雞大腸埃希菌與沙門菌混合感染的病原分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J]. 李衛(wèi),白家媛,蔡雙雙.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2011(01)
[9]腸炎沙門菌間接ELISA檢測方法的建立[J]. 康孟佼,朱春紅,蔣穎,姚豐華,吳娟,段小麗,朱國強(qiáng).  中國家禽. 2010(15)
[10]沙門氏菌載體在疫苗應(yīng)用中的研究進(jìn)展[J]. 安芳蘭,劉學(xué)榮,宋玉霞,武發(fā)菊,董文教,劉萍,牟克斌,黃銀君,黃安倉.  中國畜牧獸醫(yī). 2010(06)

博士論文
[1]腸炎沙門氏菌生物被膜形成相關(guān)基因鑒定、缺失株構(gòu)建及生物學(xué)特性研究[D]. 董洪燕.揚(yáng)州大學(xué) 2011

碩士論文
[1]雞白痢沙門菌LPS合成相關(guān)基因缺失株的構(gòu)建及免疫效力評(píng)價(jià)[D]. 吳白.揚(yáng)州大學(xué) 2016
[2]沙門菌多重PCR檢測方法的建立及雞白痢沙門菌aroA缺失株的構(gòu)建[D]. 楊林.揚(yáng)州大學(xué) 2014
[3]沙門氏菌分離鑒定、生物被膜形成相關(guān)基因缺失突變株的構(gòu)建及生物學(xué)特性研究[D]. 孫化露.揚(yáng)州大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3489142