鴨疫里默氏桿菌（Riemerella anatipestifer,RA）是出現(xiàn)在鴨、鵝和火雞等多種禽類的一種重要病原菌,其感染給養(yǎng)鴨業(yè)帶來嚴重的經(jīng)濟損失。為了有效的防治鴨疫里默氏桿菌,我們從分子水平對其生物學機制進行研究。IX分泌系統(tǒng)（T9SS）,又稱為Por分泌系統(tǒng),是近年來鑒定的、目前僅發(fā)現(xiàn)于擬桿菌門中細菌的分泌系統(tǒng)。GenBank上已公布全基因組序列的所有8株鴨疫里默氏桿菌都攜帶13個編碼T9SS核心組分的基因,提示此細菌有完整的IX型分泌系統(tǒng)。因此,T9SS作為鴨疫里默氏桿菌唯一已知的分泌系統(tǒng),在該細菌與宿主的相互作用及細菌致病過程中作用就尤其值得關注。本研究將通過構(gòu)建Yb2株gldN基因缺失株來分析其相關的功能。本研究先將gldN基因上下游同源臂連入自殺質(zhì)粒313,通過接合轉(zhuǎn)導的方法導入鴨疫里默氏桿菌Yb2株,構(gòu)建獲得gldN基因缺失突變株Yb2△gldN;然后將野生株Yb2株的gldN基因ORF連入大腸桿菌-鴨疫里默氏桿菌穿梭表達質(zhì)粒pRES1,再通過接合轉(zhuǎn)導的方法將重組質(zhì)粒pRES1-gldN導入缺失株Yb2△gldN中,獲得了其回復株cYb2△gldN。然后比較了野生株... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

革蘭氏陰性菌分泌系統(tǒng)模型摘自文獻(GreenandJoanMecsas.,2016)

農(nóng)業(yè)科學院碩士學位論文 第一章 引蛋白質(zhì)定位在細胞外膜上，而在其定位的過程中T9SS系統(tǒng)起著重要作用，而且這些蛋白質(zhì)主過T9SS分泌釋放出去(Shoji et al.,2011 ; Kondo et al.,2010)。各種細菌T9SS系統(tǒng)的研究越來越，針對鴨疫里默氏桿菌T9SS轉(zhuǎn)運系統(tǒng)的研究近年來才剛剛開始，2013年，McBride通過研究PorSS分泌系統(tǒng)廣泛存在于擬桿菌門中，包括鴨疫里默氏桿菌(McBride and Zhu.,2013)。隨后研究證明鴨疫里默氏桿菌的毒力及明膠酶的分泌需要T9SS系統(tǒng)參與(Guo et al.,2017)。這為鴨默氏桿菌T9SS系統(tǒng)的研究奠定了基礎。

碩士學位論文 第二章 鴨疫里默氏桿菌 gldN 基因缺失株的構(gòu)建及其 后細菌在鴨血液和組織中定植數(shù)量分析：攻毒結(jié)束 24 h 后，分別的 14 只鴨子進行抽血解剖。所抽取的血液直接掛板，而解剖的肝組織放入研磨袋中并加入 3 mL 的無菌 PBS，用研磨儀對組織進行 進行涂布平板，血液以及組織研磨液均在含有卡那霉素（25 μg/m℃ 5%CO2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)長出單菌落，記錄分析數(shù)據(jù)。 gldN 基因突變株的構(gòu)建 gldN 基因左右兩側(cè)同源臂 DNA 片段的克隆稀釋后的 Yb2 株基因組為模板，用 gldN-L F/R、gldN-R F/R 引物的同源臂片段 gldN-L（圖 2-1，泳道 1）、gldN-R（圖 2-1，泳道 3）化 E.coli 726 以便得到足量的目的片段進行后續(xù)試驗，PCR 鑒定陽公司進行測序。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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