山羊傳染性胸膜肺炎（Contagious caprine pleuropneumoniae,CCPP）是山羊支原體山羊肺炎亞種（Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp）引起的一種纖維素性肺炎,發(fā)病率為22%³0%,有的高達60%⁸0%,死亡率為15%³0%,給山羊養(yǎng)殖業(yè)帶來了極大的威脅。目前有關(guān)該病研究主要集中在病原的分離鑒定和流行病學(xué)調(diào)查,其免疫致病機制研究較少。本試驗采集臨床疑似CCPP病羊的鼻拭子,經(jīng)PCR確診后,對病原進行分離培養(yǎng)、分子生物學(xué)方法鑒定、動物回歸試驗;用分離鑒定的CCPP病原,通過氣管內(nèi)接種構(gòu)建CCPP模型,檢測PBMCs、肺臟中IL-17及其相關(guān)細胞因子、免疫細胞的變化;通過Mccp菌體全蛋白體外刺激PBMCs和肺來源細胞,在mRNA水平檢測IL-17及其相關(guān)細胞因子的變化;通過rIL-17刺激山羊肺上皮細胞,在mRNA水平檢測趨化因子的變化。研究獲得如下結(jié)果:1.分離純化菌株在固體平板上,呈現(xiàn)中心臍、邊緣光滑、油煎蛋狀樣;生化試驗均符合山... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 山羊傳染性胸膜肺炎的研究進展
        1.1.1 山羊傳染性胸膜肺炎病原學(xué)研究
        1.1.2 流行病學(xué)與臨床癥狀
        1.1.3 病理變化和致病機理
        1.1.4 分離鑒定
        1.1.5 防治措施
    1.2 IL-17 和肺部炎癥的研究進展
        1.2.1 IL-17 來源
        1.2.2 IL-17 家族和IL-17 受體家族
        1.2.3 IL-17 受體信號
        1.2.4 IL-17 與肺部免疫防御研究
        1.2.5 IL-17 與肺部損傷的研究
        1.2.6 IL-17 與支原體感染研究
    1.3 支原體的致病機制研究
        1.3.1 直接損傷
        1.3.2 免疫損傷
第二章 山羊支原體山羊肺炎亞種地方毒株的分離鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 病料
        2.1.2 菌株
        2.1.3 試驗動物
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要儀器
        2.1.6 主要溶液配置
    2.2 方法
        2.2.1 PCR檢測
        2.2.2 分離培養(yǎng)
        2.2.3 形態(tài)學(xué)觀察
        2.2.4 生化特性鑒定
        2.2.5 分子生物學(xué)鑒定
        2.2.6 動物回歸試驗
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 樣品PCR檢測結(jié)果
        2.3.2 分離培養(yǎng)與染色鏡檢
        2.3.3 生化特性鑒定
        2.3.4 PCR鑒定
        2.3.5 16sRNA基因分析
        2.3.6 動物回歸試驗
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 介導(dǎo)山羊傳染性胸膜肺炎的細胞亞群及相關(guān)細胞因子研究
    3.1 材料
        3.1.1 菌株
        3.1.2 實驗動物
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器與分析軟件
        3.1.5 主要溶液配方及配制
    3.2 方法
        3.2.1 CCPP山羊模型的建立與鑒定
        3.2.2 PCR檢測
        3.2.3 血液樣品采集及處理
        3.2.4 肺組織樣品及處理
        3.2.5 總RNA提取和cDNA的合成
        3.2.6 PBMCs和肺組織細胞因子相對表達量的測定
        3.2.7 肺部組織切片的制備與觀察
        3.2.8 肺組織免疫熒光染色
        3.2.9 NO、MDA、SOD檢測
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 山羊感染 CCPP 后的臨床及病理變化結(jié)果
        3.3.2 血常規(guī)分析
        3.3.3 血液中IL-17 及其相關(guān)細胞因子的動態(tài)變化結(jié)果
        3.3.4 肺組織中IL-17 及其相關(guān)細胞因子變化結(jié)果
        3.3.5 肺組織免疫熒光染色
        3.3.6 NO、MDA、T-SOD測定
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 山羊傳染性胸膜肺炎肺組織損傷的機理研究
    4.1 材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 試驗動物
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器
        4.1.5 主要溶液配方與配制
    4.2 方法
        4.2.1 Mccp全蛋白制備
        4.2.2 山羊肺細胞及肺上皮細胞的制備
        4.2.3 Mccp全蛋白刺激PBMCs細胞因子測定
        4.2.4 Mccp全蛋白刺激肺細胞細胞因子測定
        4.2.5 rIL-17 對山羊肺上皮細胞趨化因子表達的影響
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 山羊肺細胞及肺上皮細胞的制備
        4.3.2 Mccp全蛋白刺激濃度確定結(jié)果
        4.3.3 Mccp刺激PBMCs細胞因子測定結(jié)果
        4.3.4 Mccp全蛋白刺激肺細胞細胞因子測定結(jié)果
        4.3.5 rIL-17 蛋白對山羊肺上皮細胞趨化因子表達測定結(jié)果
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第五章 結(jié)論
參考文獻
縮略表
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
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本文編號：3484819