為了建立可同時(shí)檢測超級(jí)細(xì)菌bla_NDM-1基因和mcr-1基因的快速檢測方法,針對(duì)bla_NDM-1基因和mcr-1基因保守序列設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan探針,以構(gòu)建含有bla_NDM-1基因和mcr-1基因片段的重組質(zhì)粒作為陽性標(biāo)準(zhǔn)品,通過優(yōu)化各種反應(yīng)條件,建立同時(shí)檢測bla_NDM-1基因和mcr-1基因的雙重?zé)晒舛縋CR方法。該方法能夠特異性擴(kuò)增bla_NDM-1基因和mcr-1基因質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品,而對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)菌株的檢測結(jié)果均為陰性。兩種質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的檢出下限均為1.63×10¹拷貝/μL,比常規(guī)PCR敏感性高100倍;組內(nèi)和組間重復(fù)試驗(yàn)的變異系數(shù)均小于2%。應(yīng)用所建立的方法對(duì)55株雞源致病性沙門氏菌、10株生鮮畜禽產(chǎn)品源大腸桿菌臨床分離株進(jìn)行檢測,未發(fā)現(xiàn)攜帶bla_NDM-1基因和mcr-1基因的沙門氏菌分離株,發(fā)現(xiàn)2株攜帶bla_NDM-1基因和1株攜帶mcr-1基因的大腸桿菌分離株。結(jié)果表明,本研究所建立的雙重?zé)晒舛?.. 

【文章來源】：中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2020,28(05)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒p-NDM-1(A)和p-mcr-1(B)的鑒定

圖3 雙重?zé)晒舛縋CR特異性試驗(yàn)

以等比例混合的濃度為1.63×103、1.63×104、1.63×105拷貝/μL的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品p-NDM-1、p-mcr-1為模板進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)。結(jié)果顯示,組內(nèi)和組間重復(fù)性試驗(yàn)的變異系數(shù)為0.58%～1.90%,均小于2%(表2),具有良好的重復(fù)性。2.7 臨床樣品檢測

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]肉雞產(chǎn)業(yè)鏈NDM和MCR-1陽性大腸桿菌分子流行病學(xué)研究[D]. 張榮民.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3484460