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短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus 4D-14)的分離與分子鑒定,抑菌性及微生態(tài)制劑應(yīng)用研究

發(fā)布時(shí)間:2021-11-08 13:17
  本論文首先在微量肉湯稀釋法基礎(chǔ)上建立了實(shí)驗(yàn)室96孔板快速篩選方法;然后從疫病多發(fā)的養(yǎng)殖場(chǎng)土壤和市場(chǎng)動(dòng)物微生態(tài)產(chǎn)品中分離到多株芽孢桿菌;選取部分從土壤中分離的芽孢桿菌菌株,利用鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)ATCC14028作為指示菌進(jìn)行芽孢桿菌抑菌能力初篩,得到來(lái)源于養(yǎng)殖場(chǎng)土壤的抑菌型芽孢桿菌7株;將抑菌效果較突出的7株芽孢桿菌和市場(chǎng)產(chǎn)品中分離的芽孢桿菌進(jìn)一步用4株不同血清型動(dòng)物源病原菌大腸桿菌(Escherichia coli)E1、E3、E4,及雞沙門氏菌(Salmonella gallinarum)SC1,豬沙門氏菌(Salmonella choleraesuis)和SP1綠膿桿菌(pseudomonas aeruginosa)等進(jìn)行了抑菌能力評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)來(lái)自土壤的芽孢桿菌菌株4D-14和J-14,及來(lái)自市場(chǎng)產(chǎn)品的芽孢桿菌菌株Y14和Y16等,體外抑菌效果與20ppm的硫酸粘桿菌素相當(dāng)。使用16SrRNA及gyrB基因分子鑒定法,對(duì)來(lái)自養(yǎng)殖場(chǎng)土壤和市場(chǎng)產(chǎn)品的抑菌型芽孢桿菌菌株進(jìn)行了鑒定。發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖場(chǎng)土壤來(lái)源的抑菌型芽孢桿菌以蠟樣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和... 

【文章來(lái)源】:中國(guó)海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】:108 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【文章目錄】:
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 微生態(tài)概述
        1.1.1 微生態(tài)的定義及其演變
        1.1.2 微生態(tài)發(fā)展歷史
        1.1.3 微生態(tài)的保健作用
        1.1.4 微生態(tài)作用機(jī)理研究進(jìn)展
        1.1.5 微生態(tài)研究熱點(diǎn)
            A 益生菌基因組分析
            B 益生菌作為載體表達(dá)功能基因
        1.1.6 微生態(tài)的應(yīng)用
            A 微生態(tài)在飼料中的應(yīng)用
            B 微生態(tài)在養(yǎng)殖中的應(yīng)用
            C 微生態(tài)在醫(yī)藥保健中的應(yīng)用
            D 微生態(tài)在功能食品中的應(yīng)用
    1.2 動(dòng)物微生態(tài)
        1.2.1 動(dòng)物微生態(tài)研究概況
        1.2.2 動(dòng)物微生態(tài)允許使用的菌種
        1.2.3 動(dòng)物微生態(tài)制劑技術(shù)
            A 動(dòng)物微生態(tài)制劑工藝流程概況
            B 發(fā)酵工藝
            C 固液分離技術(shù)
                1)板框壓濾
                2)膜過濾
                3)離心
            D 干燥技術(shù)
                1)氣流干燥
                2)沸騰干燥
                3)噴霧干燥
                4)冷凍干燥
            E 后處理技術(shù)
            F 動(dòng)物微生態(tài)應(yīng)用配套技術(shù)
        1.2.4 國(guó)內(nèi)微生態(tài)行業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀與存在的問題
    1.3 我國(guó)家禽養(yǎng)殖業(yè)
        1.3.1 家禽養(yǎng)殖業(yè)質(zhì)量安全體系建設(shè)
        1.3.2 抗生素在養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用
        1.3.3 獸用抗生素的殘留情況
        1.3.4 如何減少飼料中抗生素的使用
    1.4 本文選題依據(jù)與意義
    1.5 本文的研究?jī)?nèi)容
2 抑菌性芽孢桿菌的篩選
    前言
    2.1 材料
        2.1.1 藥品與試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 養(yǎng)殖場(chǎng)土壤及市場(chǎng)微生態(tài)產(chǎn)品中芽孢桿菌的分離與純化
        2.2.2 養(yǎng)殖場(chǎng)土壤來(lái)源芽孢桿菌抑菌性能初篩
        2.2.3 土壤來(lái)源抑菌型芽孢桿菌抑菌性能評(píng)價(jià)
        2.2.4 市場(chǎng)動(dòng)物微生態(tài)產(chǎn)品來(lái)源芽孢桿菌抑菌性能評(píng)價(jià)
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 養(yǎng)殖場(chǎng)土壤及市場(chǎng)微生態(tài)產(chǎn)品中芽孢桿菌的分離與純化
            A 分離自養(yǎng)殖場(chǎng)土壤的芽孢桿菌
            B 分離自市場(chǎng)微生態(tài)產(chǎn)品的芽孢桿菌
        2.3.2 部分養(yǎng)殖場(chǎng)土壤來(lái)源的芽孢桿菌抑菌性能初篩
        2.3.3 土壤來(lái)源抑菌型芽孢桿菌抑菌性能評(píng)價(jià)
        2.3.4 市場(chǎng)動(dòng)物微生態(tài)產(chǎn)品來(lái)源芽孢桿菌抑菌性能評(píng)價(jià)
    2.4 小結(jié)
3 抑菌型芽孢桿菌的分子鑒定
    前言
    3.1 材料
        3.1.1 藥品與試劑
        3.1.2 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 新鮮菌液制備
        3.2.2 菌株基因組 DNA 提取
            A PCR 擴(kuò)增 16S R RNA 序列
            B PCR 擴(kuò)增 GYR B 基因序列
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 16S R RNA 鑒定結(jié)果
        3.3.2 GYR B 基因鑒定結(jié)果
        3.3.3 抑菌型短小芽孢桿菌 4D-14 系統(tǒng)發(fā)育情況分析
            A 16S R RNA 及 GYR B 基因序列的克隆
            B 基于 16S R RNA 序列的系統(tǒng)發(fā)育分析
            C 基于 GYR B 基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析
    3.4 小結(jié)
4 芽孢桿菌上清液抑菌活性物的性質(zhì)分析
    前言
    4.1 材料
        4.1.1 藥品與試劑
        4.1.2 主要儀器
    4.2 方法
        4.2.1 病原菌培養(yǎng)
        4.2.2 對(duì)照組
        4.2.3 芽孢桿菌上清液處理組
        4.2.4 抑菌率計(jì)算
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 蛋白酶對(duì)抑菌物質(zhì)的影響
        4.3.2 溫度對(duì)抑菌物質(zhì)的影響
        4.3.3 PH 對(duì)抑菌物質(zhì)的影響
    4.4 小結(jié)
5 抑菌型芽孢桿菌微生態(tài)制劑
    前言
    5.1 材料
        5.1.1 藥品與試劑
        5.1.2 主要儀器
    5.2 方法
        5.2.1 工藝流程
        5.2.2 發(fā)酵罐與培養(yǎng)基準(zhǔn)備
        5.2.3 發(fā)酵及后處理
            A 發(fā)酵
            B 發(fā)酵液后處理
        5.2.4 芽孢桿菌樣品菌量計(jì)數(shù)
    5.3 結(jié)果與討論
    5.4 小結(jié)
6 肉雞養(yǎng)殖試驗(yàn)
    前言
    6.1 材料
        6.1.1 藥品與試劑
            A 抗生素與微生態(tài)制劑等
            B 動(dòng)物品種及基礎(chǔ)日糧
        6.1.2 主要儀器
    6.2 方法
        6.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        6.2.2 飼養(yǎng)管理
        6.2.3 測(cè)定指標(biāo)
            A 生產(chǎn)性能
            B 糞便中的微生物
            C 免疫水平
            D 免疫器官指數(shù)
            E 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察
        6.2.4 數(shù)據(jù)分析
    6.3 結(jié)果與討論
        6.3.1 對(duì)肉雞生產(chǎn)性能的影響
            A 對(duì) 0-7 日齡肉雞生產(chǎn)性能的影響
            B 對(duì) 8-21 日齡肉雞生產(chǎn)性能的影響
            C 對(duì) 22-35 日齡肉雞生產(chǎn)性能的影響
            D 對(duì) 0-35 日齡肉雞生產(chǎn)性能的影響
        6.3.2 對(duì)糞便中微生物的影響
            A 芽孢桿菌
            B 乳酸桿菌
            C 雙歧桿菌
            D 大腸桿菌
            E 沙門氏菌
            F 產(chǎn)氣莢膜梭菌
        6.3.3 免疫水平
        6.3.4 免疫器官發(fā)育程度
            A 免疫器官發(fā)育程度判定標(biāo)準(zhǔn)
            B 免疫器官指數(shù)
        6.3.5 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察
            A 腸道觀察測(cè)量參考
            B 腸道形態(tài)觀察結(jié)果
    6.4 小結(jié)
全文總結(jié)
創(chuàng)新性
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與科研項(xiàng)目、研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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[2]我國(guó)家禽養(yǎng)殖業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)[J]. 袁正東.  中國(guó)家禽. 2011(03)
[3]利用16S rDNA結(jié)合gyrA和gyrB基因?qū)ι姥挎邨U菌R31的快速鑒定[J]. 喻國(guó)輝,牛春艷,陳遠(yuǎn)鳳,陳燕紅,楊紫紅.  中國(guó)生物防治. 2010(02)
[4]gyrB基因在細(xì)菌分類和檢測(cè)中的應(yīng)用[J]. 安然,易圖永,肖啟明,鄧子牛.  江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2010(04)
[5]枯草芽孢桿菌制劑對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和養(yǎng)分消化率的影響[J]. 李俊波,成廷水,呂武興,彭鵬.  中國(guó)家禽. 2009(04)
[6]土傳棉花黃萎病拮抗菌的篩選及其生物效應(yīng)[J]. 張慧,楊興明,冉煒,徐陽(yáng)春,沈其榮.  土壤學(xué)報(bào). 2008(06)
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[8]養(yǎng)殖業(yè)抗生素的使用及其潛在危害[J]. 王云鵬,馬越.  中國(guó)抗生素雜志. 2008(09)
[9]高產(chǎn)酶活枯草芽孢桿菌制劑在奶牛生產(chǎn)上的應(yīng)用研究[J]. 王振華.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(27)
[10]乳酸菌類微生物制劑的研究[J]. 陳紅梅.  飼料研究. 2008(08)

博士論文
[1]基于海藻酸鈉的微膠囊構(gòu)建技術(shù)及其在干態(tài)乳酸菌中的應(yīng)用[D]. 李曉巖.中國(guó)海洋大學(xué) 2009

碩士論文
[1]凝結(jié)芽孢桿菌和費(fèi)氏丙酸桿菌發(fā)酵及制劑工藝研究[D]. 崔東良.河北大學(xué) 2008
[2]地衣芽孢桿菌制劑對(duì)肉仔雞、斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響及機(jī)理[D]. 王洪燕.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號(hào):3483774

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