發(fā)布時間：2021-11-08 09:44

　　為體外表達豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）糖基化囊膜蛋白GP5,以及制備其多克隆抗體,以PRRSV PC疫苗株RNA為模板,應用RT-PCR擴增GP5基因,并克隆至原核表達載體pET-32a（+）,構建重組表達載體pET-32a-GP5。經(jīng)過酶切和測序鑒定后,將陽性重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細胞中,加入IPTG低溫誘導表達。使用親和層析法純化PRRSV GP5蛋白。然后將純化的蛋白免疫北京大耳白兔制備多克隆抗體,并進行酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和間接免疫熒光分析（IFA）。結(jié)果顯示,表達的PRRSV GP5原核蛋白以可溶性和包涵體兩種形式存在,相對分子質(zhì)量大約30 kDa;制備的GP5蛋白多克隆抗體ELISA效價可達1:64 000;IFA檢測顯示,制備的多克隆抗體能夠識別PRRSV。重組PRRSV GP5蛋白及其多克隆抗體的成功制備為PRRSV血清學檢測方法的建立提供了良好的生物學材料。 

【文章來源】：中國動物檢疫. 2020,37(10)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

GP5基因PCR擴增結(jié)果

p ET-32a-GP5重組質(zhì)粒雙酶切電泳檢測結(jié)果

利用鎳柱，對菌體裂解產(chǎn)物上清中的GP5蛋白進行純化。SDS-PAGE電泳、考馬斯亮藍染色結(jié)果顯示，含重組表達質(zhì)粒p ET-32a-GP5的菌體在IPTG的誘導下表達出了一條約30 k Da的蛋白條帶（圖3），通過純化、濃縮，獲得了GP5蛋白。經(jīng)BCA試劑盒測定該蛋白的終濃度為223.84μg/m L。2.3 GP5蛋白Western Blot檢測

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]Marc-145細胞內(nèi)GP5表達對豬繁殖與呼吸綜合征病毒感染的影響[D]. 張茂東.西北農(nóng)林科技大學 2015
[4]基于母豬PRRS抗體水平確定仔豬疫苗首免日齡的研究[D]. 梁百里.湖南農(nóng)業(yè)大學 2014
[5]PRRSV GP5基因亞克隆、原核表達及ELISA抗體檢測方法的建立[D]. 李建輝.河北農(nóng)業(yè)大學 2012
[6]PRRSV CH-1a株致弱過程中的遺傳變異分析及CH-1R株全長cDNA分子克隆的構建[D]. 石文達.東北農(nóng)業(yè)大學 2008



本文編號：3483487