黑色素合成是極其復(fù)雜的過(guò)程,其中涉及多種基因和miRNAs的參與。miR-186-5p在綿羊不同毛色皮膚中差異表達(dá),說(shuō)明其可能與毛色形成有關(guān),生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和綿羊不同毛色皮膚中miR-186-5p和Mitf的差異表達(dá)間接說(shuō)明二者可能存在靶向關(guān)系,雙熒光報(bào)告直接證實(shí)了二者的靶向關(guān)系。為了證實(shí)miR-186-5p在黑色素形成中的作用,本研究構(gòu)建miR-186-5p真核表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染綿羊黑素細(xì)胞。結(jié)果顯示,miR-186-5p通過(guò)與Mitf mRNAs的3′UTR結(jié)合抑制Mitf的表達(dá)和翻譯。MITF是Tyr基因家族的調(diào)節(jié)因子。實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR）和Western免疫印跡結(jié)果表明,過(guò)表達(dá)miR-186-5p引起的MITF下調(diào)抑制了TYR、TYRP1和TYRP2的表達(dá)。其中,mRNA表達(dá)水平分別下降34%、66%和52%;蛋白質(zhì)表達(dá)水平分別下降32%、6%和46%。分光光度檢測(cè)結(jié)果顯示,黑色素含量下降59%倍。上述結(jié)果表明,miR-186-5p通過(guò)抑制靶基因Mitf的表達(dá),抑... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2020,36(08)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 皮膚樣品的采集
    1.3 靶基因預(yù)測(cè)及篩查
    1.4 雙熒光報(bào)告驗(yàn)證miR-186-5p與Mitf的靶向關(guān)系
    1.5 黑素細(xì)胞的復(fù)蘇與轉(zhuǎn)染
    1.6 黑色素含量測(cè)定
    1.7 miR-186-5p原位雜交檢測(cè)
    1.8 qRT-PCR檢測(cè)
    1.9 Western印跡檢測(cè)
    1.10 免疫組織化學(xué)檢測(cè)
    1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 miR-186-5p和Mitf在不同毛色綿羊皮膚中的表達(dá)差異顯著
    2.2 生物信息學(xué)預(yù)測(cè)Mitf是miR-186-5p的靶基因
    2.3 雙熒光報(bào)告檢測(cè)證實(shí)Mitf是miR-186-5p的靶基因
    2.4 綿羊黑素細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-186-5p抑制黑色素的生成
    2.5 原位雜交檢測(cè)miR-186-5p在綿羊黑素細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中表達(dá)
    2.6 轉(zhuǎn)染miR-186-5p后相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平降低
    2.7 轉(zhuǎn)染miR-186-5p后相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)水平降低
    2.8 免疫組化檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-186-5p抑制了綿羊黑素細(xì)胞中MITF的表達(dá)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miR-186-5p對(duì)綿羊黑色素細(xì)胞遷移增殖的影響[J]. 許冬梅,趙宇軍,杜斌,張亞玲,朱芷葳,謝建山,范瑞文,于秀菊,董常生.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(11)
[2]miR-146a抑制酪氨酸酶基因家族在小鼠黑色素細(xì)胞中表達(dá)[J]. 杜斌,許冬梅,張亞玲,范瑞文,劉學(xué)賢,于秀菊,趙宇軍,董常生.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2017(01)
[3]miR-324-3p通過(guò)調(diào)控MC1R基因影響黑色素的形成[J]. 曾慶寶,范瑞文,張秋月,郝曉娟,武良琦,任玉紅.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2016(07)
[4]過(guò)表達(dá)miR-193b對(duì)黑色素細(xì)胞中MITF和TYR表達(dá)的影響[J]. 張亞玲,許冬梅,杜斌,謝建山,范瑞文,于秀菊,朱芷葳,董常生.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2016(05)
[5]Hsa-miR-186在結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)及作用[J]. 陳芳,周暢,陸艷霞,袁理,彭皤莉,鄭林,李學(xué)農(nóng).  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(05)
[6]MicroRNAs在動(dòng)物皮膚和毛發(fā)發(fā)育中的調(diào)控作用[J]. 劉丹丹,赫曉燕,郝歡慶.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2010(09)



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