口蹄疫（Foot-and-Mouth Disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒引起的豬、牛、羊等偶蹄動物的一種烈性傳染病，給流行國家和地區(qū)帶來嚴重的經(jīng)濟損失，篩選與田間流行毒株基因型相近的、免疫原性良好的、適合生產(chǎn)特性的制造疫苗毒株，將對疫情的有效控制會起到非常重要的作用。本論文針對中國農(nóng)業(yè)科學院國家口蹄疫參考實驗室分離鑒定的四株東南亞拓撲型緬甸98系O型口蹄疫乳鼠毒，開展了實驗室乳鼠傳代、實驗室方瓶細胞傳代馴化、生產(chǎn)車間細胞轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)傳代適應以及制作疫苗的評價工作；根據(jù)以上三階段毒種傳代過程中的收毒時間、病毒含量以及對靶動物和靶細胞的適應情況，選擇出一株傳代穩(wěn)定、病毒含量較高的適合生產(chǎn)的疫苗種毒株—O/XJ/10-11株。經(jīng)傳代培養(yǎng)后，將收獲的S01、S02、S03三批次病毒液分別按照工藝要求進行滅活處理，制成滅活疫苗（期間進行滅活效果檢驗、成品性狀檢驗、成品安全檢驗等），與現(xiàn)行經(jīng)典的OZK/93株制作的3批疫苗同時免疫經(jīng)篩選的易感動物豬，在同等條件下飼養(yǎng)，比較疫苗免疫后28天供試豬血清抗體效價，并進行疫苗交叉攻毒保護試驗，初步評估兩種疫苗的免疫效果。結(jié)果顯示，兩種疫苗免疫動物后，都可刺... 

【文章來源】：新疆農(nóng)業(yè)大學新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

接毒前（100×）

期間每個滴度換一支吸頭，取 10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，10-9等各稀釋度，接種于生長有 BHK-21 細胞單層的 96 孔培養(yǎng)板中，每稀釋度接種 4~5 孔，每孔接毒 0.1ml，同時，設正常細胞對照。接種后置 37℃下 CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng) 3 日，每日觀察細胞病變，根據(jù)出現(xiàn)細胞病變孔數(shù)，按照 Reed-Muench 法計算 TCID50。3.2 結(jié)果與分析實驗研究發(fā)現(xiàn)，O/GD/10-9 株、O/GX/10-10 株毒在 BHK-21 細胞上傳代三代后，并無典型 CPE 出現(xiàn)，無法進行 TCID50測定，因而本實驗改用 PK-15 細胞對兩株毒進行傳代馴化，當傳至第三代，表現(xiàn)出一定的口蹄疫典型 CPE 后，改用 BHK-21 細胞繼續(xù)傳代才獲得了典型 CPE。其余兩株毒傳代表現(xiàn)正常，在 BHK-21 細胞傳代三代后，逐漸出現(xiàn)典型 CPE。四株毒種 BF5 代毒接種 BHK-21 細胞前及出現(xiàn) CPE 后，細胞顯微成像圖如下：

圖 3-3 接毒前（100×） 圖 3-4 接種 O/GD/10-9 株后細胞 CPE（100×圖 3-5 接毒前（100×） 圖 3-6 接種 O/GX/10-10 株后細胞 CPE（100×

【參考文獻】：
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本文編號：3479505