發(fā)布時間：2021-11-05 02:21

　　旨在對轉(zhuǎn)錄組測序中單羔組對多羔組TGFβ2和PPP3CA基因的上、下調(diào)結(jié)果進(jìn)行驗證,并探究黔北麻羊TGFβ2和PPP3CA基因?qū)β殉差w粒細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制。本研究以單、多羔黔北麻羊母羊為試驗對象。通過RT-qPCR技術(shù)檢測TGFβ2與PPP3CA基因在單、多羔黔北麻羊性腺軸中的表達(dá)水平;構(gòu)建目的基因真核表達(dá)載體。培養(yǎng)黔北麻羊卵巢顆粒細(xì)胞,并利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將pEGFP-N3-TGFβ2、pEGFP-N3-PPP3CA重組質(zhì)粒導(dǎo)入卵巢顆粒細(xì)胞,檢測培養(yǎng)基中雌二醇（E2）、孕酮（P4）的濃度。利用CCK-8和Annexin V-FITC法檢測TGFβ2、PPP3CA基因?qū)β殉差w粒細(xì)胞增殖、凋亡的影響。隨后,利用RT-qPCR從細(xì)胞水平檢測超表達(dá)TGFβ2、PPP3CA基因?qū)GFβ2、PPP3CA、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因表達(dá)的影響。RT-qPCR結(jié)果表明,TGFβ2與PPP3CA基因在被檢測的組織中均有表達(dá),且在單羔組中的表達(dá)量普遍高于多羔組;免疫熒光法證實,所培養(yǎng)的細(xì)胞為黔北麻羊卵巢顆粒細(xì)胞;TGFβ2與PPP3CA基因真核表達(dá)質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞后,在極顯著提高TGFβ2與... 

【文章來源】：畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2020,51(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗樣品
    1.2 主要試劑
    1.3 引物設(shè)計
    1.4 黔北麻羊性腺軸組織RNA提取及cDNA合成
    1.5 RT-qPCR檢測TGFβ2、PPP3CA基因在黔北麻羊性腺軸組織中的表達(dá)水平
    1.6 TGFβ2、PPP3CA基因真核表達(dá)載體構(gòu)建
    1.7 黔北麻羊卵巢顆粒細(xì)胞的分離與鑒定
        1.7.1 卵巢顆粒細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        1.7.2 卵巢顆粒細(xì)胞的鑒定
    1.8 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染
    1.9 超表達(dá)TGFβ2、PPP3CA基因?qū)Υ贫�、孕酮生成的影�?br>    1.10 超表達(dá)TGFβ2、PPP3CA基因?qū)︻w粒細(xì)胞增殖和凋亡的影響
    1.11 超表達(dá)TGFβ2、PPP3CA基因?qū)Ψ敝诚嚓P(guān)基因表達(dá)的影響
    1.12 數(shù)據(jù)處理及分析方法
2 結(jié) 果
    2.1 TGFβ2、PPP3CA基因在黔北麻羊不同組織中的表達(dá)
    2.2 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定
    2.3 卵巢顆粒細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定
        2.3.1 卵巢顆粒細(xì)胞分離培養(yǎng)
        2.3.2 卵巢顆粒細(xì)胞鑒定
    2.4 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率檢測
    2.5 超表達(dá)TGFβ2、PPP3CA基因?qū)Υ贫肌⒃型傻挠绊?br>    2.6 超表達(dá)TGFβ2、PPP3CA基因?qū)︻w粒細(xì)胞增殖的影響
    2.7 超表達(dá)TGFβ2、PPP3CA基因?qū)︻w粒細(xì)胞凋亡的影響
    2.8 超表達(dá)TGFβ2、PPP3CA基因?qū)Ψ敝诚嚓P(guān)基因表達(dá)的影響
3 討 論
4 結(jié) 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]蛋白磷酸酶2A的結(jié)構(gòu)、功能和活性調(diào)節(jié)[J]. 劉衛(wèi)軍,沈瑛,丁健.  生物化學(xué)與生物物理學(xué)報. 2003(02)

博士論文
[1]神經(jīng)鈣調(diào)蛋白磷酸酶PPP3CA特異性siRNA對VEGF和FGF2誘導(dǎo)的羊胎盤動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞殖的影響[D]. 王凱.大連醫(yī)科大學(xué) 2008



本文編號：3476875