精原干細胞（spermatogonial stem cells,SSC）是哺乳動物體內(nèi)唯一可以將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細胞。豬作為一種重要的模式動物,建立和完善豬精原干細胞（pSSC）的培養(yǎng)體系非常重要。已有的精原干細胞長期培養(yǎng)體系并不能完全實現(xiàn)豬精原干細胞的體外長期培養(yǎng),因此我們需要優(yōu)化pSSCs的體外培養(yǎng)體系,為探索其生物學特性奠定基礎(chǔ)。我以2D賽天然人工合成多肽基質(zhì)涂層作為一種胞外基質(zhì),對不同的化學小分子組合進行篩選,通過添加Chir99021,Repsox以及CD脂質(zhì)濃縮物,將豬的精原干細胞體外培養(yǎng)至三個月,主要研究結(jié)果如下:1.通過篩選不同的細胞外基質(zhì)后,使用2D賽天然作為細胞培養(yǎng)基質(zhì),在體外可將豬的精原干細胞培養(yǎng)至兩個月,在培養(yǎng)過程中觀察到兩種不同的克隆形態(tài)。一種與典型的小鼠胚胎干細胞克隆類似,另一種為典型的葡萄串珠狀精原干細胞簇,前者極有可能提供一種豬多能性干細胞獲得的新方法;2通過篩選不同的化學小分子組合,最終確定Chir99021,Repsox以及CD脂質(zhì)濃縮物可以使豬精原干細胞培養(yǎng)時間從兩個月延長至三個月,并維持較好精原干細胞特性;3 pSSCs異種移植到無精... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

SSC的自我更新以及增殖(Mitsuruetal.2015)

白血病鋅指蛋白、ERM/Etv 等。在小鼠睪丸中，支持細胞會分泌膠質(zhì)細胞源神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）(Sun, Zhang, & Jin, 2011)，其主要作用是調(diào)節(jié)精原干細胞的增殖與分化比例。系列研究表明 GDNF 在精原干細胞的自我更新中起了非常關(guān)鍵的作用，是體外培養(yǎng)精原干細胞時必需添加的細胞因子之一(Kanatsu-Shinohara, Ogonuki, et al, 2005; Oatley,Avarbock, Telaranta, Fearon, & Brinster, 2006)。精原干細胞特性的維持以及功能的發(fā)揮離不開其微環(huán)境，在睪丸中，除了精原干細胞以及各級生精細胞的存在之外，還存在別的細胞類型，如支持細胞，間質(zhì)細胞，管周肌樣細胞等等（圖 1-2）。

SCF 則是一種多肽生長因子，是受體原癌基因蛋白質(zhì)(c-Kit)的配體c-Kit 可維持分化 A 型精原細胞的狀態(tài)，對未分化的 A 型精原細胞則沒有影aldi, Rossi, Dolci, Ripamonti, & Geremia, 2002)。維生素 C 是一種抗氧化劑，可以超氧自由基，從而提高精子活力，最終保護精子免受傷害（李德雪等，2001）。早期研究中，SSCs 一直被認為是單能的(Simon, Hess, & Cooke, 2010)，然而近來越多的研究表明其實際為多潛能干細胞。早期研究發(fā)現(xiàn)，SSC 在培養(yǎng)過程中重編程形成 ES 樣多潛能干細胞，盡管自發(fā)重編程的效率相對較低(An, Zheng,, 2017; Guan et al, 2006a; Kanatsu-Shinohara et al, 2004; Ko et al, 2009; Seandel et)，隨后又有研究表明，當抑制 CDH1 以及 TGFβ通路時，可以通過促進間質(zhì)細細胞轉(zhuǎn)化的過程最終提高精原干細胞自發(fā)重編程的效率（圖 1-3）。因此，精原也被認為是一種多潛能細胞的理想來源(Kanatsu-Shinohara & Shinohara, 20n et al, 2010)，其可以向多種細胞類型分化，包括平滑肌細胞、血管內(nèi)皮細胞、胞、肝干細胞樣細胞、腎實質(zhì)細胞、神經(jīng)元樣細胞、神經(jīng)上皮樣細胞等(De Chi 2014; Heer et al, 2013; Im et al, 2012; Nazm Bojnordi, Movahedin, Tiraihi, & Jav Wang et al, 2012; Wu, He, Li, & Liu, 2008)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]小鼠精原干細胞體外培養(yǎng)的一般特性[J]. 李德雪,張學明,李子義,賴良學,文興豪,杜惜明,岳占碰.  中國獸醫(yī)學報. 2001(02)



本文編號：3475557