發(fā)布時間：2021-11-03 15:52

　　為分析沙門氏菌分離株致病基因與致病性之間的關(guān)系,采集經(jīng)分離鑒定的55株雞源沙門氏菌,應(yīng)用PCR方法檢測毒力基因,通過小鼠致病試驗檢測致病性。結(jié)果顯示,所檢測的質(zhì)粒毒力基因spvR、spvA、spvB、spvC、spvD,檢出率均在60%以上;所檢測的毒力島毒力基因invH、sipA、sipB、sopA、sopD、avrA、hilA、iacP、prgK、ssaB、ssaQ、sifA、sseL、ssrA、ttrB、mgtC、misL、rmbA、rhuM、sugR、orf319、siiD、siiE、spi4H、sopB和pipC中,ttrB檢出率最高,為92.73%,sifA檢出率最低,為5.45%。55株分離株對小鼠均具有致病性,致死率為20%～100%;隨機(jī)測定其中10株的半數(shù)致死量(LD₅₀),為4×10⁷～3.18×10⁸CFU/mL,毒力基因檢出數(shù)量越多的分離株,其LD₅₀值越小,毒力越強(qiáng)。本研究結(jié)果揭示,雞源致病性沙門氏菌分離株普遍攜帶毒力基因,其毒力基因與致病性之間呈現(xiàn)正相關(guān),為深入研究沙門... 

【文章來源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020,39(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

部分沙門氏菌分離株spvA和spvC基因的PCR檢測

本研究將55株沙門氏菌分離株菌液0.2 mL(4×108CFU/mL)接種小鼠后，每隔6 h觀察一次，對照組直至168 h無異常表現(xiàn)，55個試驗組均在48 h內(nèi)出現(xiàn)癥狀，表現(xiàn)為精神萎靡、皮毛松亂、時有顫抖、糞便帶粘液。剖檢死亡小鼠，可見腹腔積液，呈黃色、粘稠；肝臟和脾臟腫大，呈青銅色，肝臟表面有針尖到針頭大小、灰白色的壞死點。取肝、脾組織分離鑒定細(xì)菌，證實為沙門氏菌。各個分離株死亡率為20%～100%(表1)。在55株雞源沙門氏菌分離株中隨機(jī)選取10株，每個菌株分成4個劑量組(濃度分別為4×109CFU/mL,4×108CFU/mL,4×107CFU/mL,4×106CFU/mL)接種小白鼠，每組5只(0.2 mL/只)。觀察致病情況，參照文獻(xiàn)(黃曉冬等,2012)，應(yīng)用改良寇氏法計算LD50,10株沙門氏菌分離株LD50測定結(jié)果如下(表2)。

沙門氏菌感染人類和動物的能力取決于細(xì)菌編碼和表達(dá)一系列侵入和突破宿主防御的毒力基因的內(nèi)在能力(Valdez et al.,2009;Foley et al.,2013)。由SPI毒力基因編碼的蛋白組成的沙門氏菌Ⅲ型分泌蛋白系統(tǒng)(T3SS)，可以改變各種宿主細(xì)胞通路，促進(jìn)沙門氏菌侵入上皮細(xì)胞以及在吞噬細(xì)胞內(nèi)的存活和繁殖，對沙門氏菌的致病性起到關(guān)鍵作用；其中SPI-1與細(xì)菌侵入宿主細(xì)胞、誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡有關(guān)，SPI-2與巨噬細(xì)胞系統(tǒng)感染和繁殖有關(guān)，SPI-3與細(xì)菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)生存以及在低鎂環(huán)境下生存能力有關(guān)，SPI-4編碼毒素分泌和凋亡相關(guān)蛋白，SPI-5編碼多種T3SS效應(yīng)蛋白。質(zhì)粒毒力基因提高細(xì)菌的粘附、定居及生存能力。通過檢測毒力基因，有助于分析和研究沙門氏菌的致病性及致病機(jī)理。Campioni等(2012)檢測來自巴西128株人源(67株)和雞源(61株)沙門氏菌攜帶invA、sipA、sipD、sopB、sopD、sopE2、ssaR、sifA、spvB、prot6E、flgK、fljB、flgL等13種毒力基因，發(fā)現(xiàn)97.6%的菌株攜帶這13種毒力基因，僅有1株未攜帶SPI-1基因sipA,2株未攜帶spv基因prot6E。Zishiri等(2016)檢測來自南非和巴西146株肉雞源沙門氏菌毒力基因ivnA、iroB、spiC、pipD、misL、orfL的攜帶情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ivnA 100%、iroB 71.2%、spiC 58.2%、pipD 50%、misL 16.4%、orfL 25.3%。孫璐等(2016)檢測來自山東省233株雞源沙門氏菌15種SPI和spv毒力基因，發(fā)現(xiàn)sptP、sseL、mgtC、siiE、sopB的檢出率為100%,spvA、spvB、spvC、spvD、spvR、iacP、avrA、prgK、fimA和stn的檢出率介于34%～99%。本研究中，對來自廣西的55株雞源沙門氏菌進(jìn)行檢測26種SPI毒力基因和5種spv毒力基因，結(jié)果發(fā)現(xiàn)5種spv基因檢出率均在60%以上，26種SPI毒力基因檢出率介于5.45%～92.73%，其中ttrB檢出率最高(92.73%)。由此推測，雞源沙門氏菌毒力基因攜帶非常普遍，并且不同國家攜帶情況有所差異，國內(nèi)不同省份(自治區(qū),直轄市)攜帶情況也各有不同，應(yīng)加強(qiáng)不同地區(qū)監(jiān)測，以及時掌握當(dāng)?shù)厣抽T氏菌分離株毒力基因的攜帶特點。沙門氏菌的致病能力取決于細(xì)菌的致病力和宿主的易感性。沙門氏菌攜帶有涉及粘附、侵入、細(xì)胞內(nèi)存活、繁殖等的各種各樣毒力基因，這些基因的存在與細(xì)菌的毒力及致病性密切相關(guān)。本研究中，以0.2 mL含有4×108CFU/mL的菌液接種小白鼠，所有55株沙門氏菌分離株對小白鼠均具有致病性，死亡率為20%～100%。隨機(jī)選取10個分離株，測定其LD50值，結(jié)果LD50值介于4.00×107～3.18×108CFU/mL之間。沙門氏菌分離株攜帶毒力基因種類越多，LD50值越小，毒力越強(qiáng)，LD50的對數(shù)值與攜帶毒力基因種類的相關(guān)系數(shù)高達(dá)0.967 0，表明毒力基因與致病性呈現(xiàn)正相關(guān)。程瓊等(2013)比較7株豬源和雞源沙門氏菌對小鼠的致病力以及攜帶spvR、spvA、spvB、spvC、spvD、invA、sscA、sseD、sseE等毒力基因的情況，發(fā)現(xiàn)沙門氏菌分離株的致病力存在明顯差異，其致病表型與毒力基因分布具有相關(guān)性。劉芳萍等(2013)測定44株雞源沙門氏菌的致病性以及SPI和spv上9種毒力基因的攜帶情況，發(fā)現(xiàn)分離株均存在不同程度的致病性，并且分離株的致病性與毒力基因的檢出率呈正相關(guān)。Card等(2016)應(yīng)用芯片技術(shù)檢測來自英國動物和肉品95株沙門氏菌分離株的105個基因，結(jié)果40個基因在所有分離株均可檢測到，2個基因在所有分離株均未檢測到，其余63個基因的檢出數(shù)量不等，基因檢出數(shù)量與分離株的致病力強(qiáng)弱具有關(guān)聯(lián)性。以上報道表明，沙門氏菌分離株的致病力與其所攜帶的毒力基因呈正相關(guān)，臨床上可以通過檢測毒力基因的攜帶情況，推測沙門氏菌分離株的致病性。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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