豬流感病毒（Swine influenza virus, SIV）是單股負(fù)鏈RNA病毒，屬于正黏病毒科，A型流感病毒屬。流感病毒有A、B、C三種型，它們均能夠感染豬，引起豬流感（Swine influenza,SI）的發(fā)生。豬流感是豬的一種急性的呼吸道傳染病，其特征為高熱、突發(fā)、流鼻涕、精神沉郁、呼吸困難、體重下降、衰竭、咳嗽、反復(fù)發(fā)作等。目前發(fā)現(xiàn)的SIV至少有H1N1、H1N2、H1N7、H3N2、H2N3、H3N1、H3N6、H5N2、H4N6、H5N1和H9N2共11種不同的亞型。根據(jù)血清學(xué)、病原學(xué)以及流行病學(xué)的研究，我國發(fā)現(xiàn)的亞型有H9N2、H5N1、H3N2、H1N2和H1N1，以H3N2和H1N1亞型的流行及危害相對(duì)比較嚴(yán)重。在我國的豬群中，長期存在著這些不同亞型的流感病毒，為病毒的基因重排創(chuàng)造了條件，這必將對(duì)我國的養(yǎng)豬業(yè)和人類的公共衛(wèi)生等產(chǎn)生潛在的威脅。國際學(xué)術(shù)界現(xiàn)在已經(jīng)普遍認(rèn)為，在人群中有流行潛力的流感病毒株可以通過豬產(chǎn)生。因此豬流感的影響不僅在其對(duì)于獸醫(yī)流行病學(xué)的意義，更在于其所產(chǎn)生的深遠(yuǎn)的公共衛(wèi)生意義。本研究以本實(shí)驗(yàn)室分離得到的A/swine/Henan/1/201... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

流感病毒的結(jié)構(gòu)示意圖

即以包涵體的形式存在。將表達(dá)重組菌超聲粉碎后離心取沉淀，按隆實(shí)驗(yàn)指南（第三版）》中從包涵體中純化表達(dá)蛋白的方法對(duì)收集的目的蛋白進(jìn)并通過分步透析的方法對(duì)各融合蛋白進(jìn)行復(fù)性。estern blot 鑒定誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳后，將目的蛋白用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移至PVDF膜上室溫封閉 1h，棄去封閉液，用 TBST 緩沖液洗滌 3 次，每次 10min，用 1∶1 HRP 標(biāo)記的抗 His-tag 鼠單抗，4℃孵育過夜，孵育結(jié)束后，用 TBST 緩沖液洗次 10min，最后用 DAB 顯色試劑盒顯色。與分析、NA、NP、M1、M2、NS1、NS2、PA、PB1 和 PB2 基因的擴(kuò)增2 HA、NA、NP、M1、M2-A、M2-B、M2、NS1、NS2、PA、PB1 和 PB2 基因，經(jīng)瓊脂糖凝膠（濃度為 1%）電泳后，分別在 1459 bp、639 bp、1512 bp、777 b50 bp、231 bp、711 bp、354 bp、354 bp、414 bp、1035 bp 左右的位置出現(xiàn)了特，擴(kuò)增產(chǎn)物的大小與測(cè)序結(jié)果的大小相符（見圖 2-1，圖 2-2）。

圖 2-2 M2、M2-B、M2-A 的 PCR 擴(kuò)Fig.2-1 PCR products of M2、M2-B、M.DNA Marker DL500;1.M2 基因;2. M2-B 基1.M2 gene;2. M2-Bgene;3. M2-A 2.2 重組質(zhì)粒的酶切鑒定提取菌液 PCR 為陽性的重組菌的質(zhì)粒：pET-28a(+)-HA-NP-R、pET-28a(+)-M1、pET-32a(+)-M2、pET-28a(+)-NS1、pEpET-28a(+)-PB1、pET-28a(+)-PB2。分別用對(duì)應(yīng)的限制性內(nèi)切進(jìn)行雙酶切，然后經(jīng)瓊脂糖凝膠（1%）電泳鑒定（見圖 2-3經(jīng)雙酶切得到了兩條特異性的片段，并且這兩條特異性的片段和目的基因片段的大小相符，說明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。


本文編號(hào)：3466175