試驗旨在探究ORFV在強弱毒株與駱駝之間其免疫相關(guān)基因所表現(xiàn)出的差異變化。通過對采集到的青島某發(fā)病羊場病料（強毒）,在山羊成纖維細(xì)胞上連續(xù)傳90代毒株以及從阿拉善某發(fā)病雙峰駝采集到的病料分別進(jìn)行病毒基因組提取,并對提取到的基因組分別命名為ORFV/QD/Y、ORFV/RD/Y、ORFV/QD/LT。根據(jù)GenBank上發(fā)表的羊口瘡全基因組序列設(shè)計并合成3對特異性引物,分別擴增 ORFV/QD/Y、ORFV/RD/Y和 ORFV/QD/LT 的 B2L 基因、F1L 基因和 VIR基因片段,并將擴增得到的基因組片段分別克隆到PMD-19T載體上,轉(zhuǎn)化到DH5α感受態(tài)細(xì)胞中,對重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定后送至測序公司進(jìn)行測序,用DNA Star軟件對測序結(jié)果進(jìn)行拼接及三組基因組之間核苷酸同源性比較分析,再將測序結(jié)果與NCBI上已公布的13組ORFV全基因組相應(yīng)基因核苷酸序列進(jìn)行同源性比對分析、構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹及氨基酸序列比對分析。結(jié)果表明,三組基因組之間B2L基因、F1L基因和VIR基因核苷酸同源性分別為84.2%～96.6%、88.0%～98.3%和77.4%～95.7%,三組基因組與參考序列的B2... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１羊口瘡病毒粒子電鏡照片（ｘｌＯＯｎｍ；?ｘ５００ｎｍ）（引遲雪林等＞??Ｆｉｇ．】Ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｍｉｃｒｏｐｈｏｔｏｇｒａｐｈ?ｏｆ?ａｎ?ｏｒｆ?ｖｉｒｏｎ．（ｂａｉ－＝ｌ?００ｎｍ；５００ｎｍ）??

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文?３??Ｃ＋Ｇ堿基對［２３＿２４］。基因組中間為中心編碼區(qū)（ＯＲＦ００９？０ＲＦ１１１），兩端為反向末端重??復(fù)序列（ＯＲＦ００１？ＯＲＦ００８和０ＲＦ１１２？ＯＲＦ１３４），如圖２所示。其中心編碼區(qū)表??現(xiàn)為高度保守，正是因為這種構(gòu)造為病毒復(fù)制和形態(tài)構(gòu)成創(chuàng)造了條件。而其基因組兩??端的末端區(qū)域則是與毒力基因相關(guān)的致病因素［２５］。研宄顯示，ＯＲＦＶ的中心編碼區(qū)與??正痘病毒屬中的牛痘病毒十分相似，但由于末端序列出現(xiàn)了基因的插入、缺失和異位??等突變現(xiàn)象使得ＯＲＦＶ與牛疸病毒顯示出高度的差異性，也導(dǎo)致了同一種屬的病毒??在物種之間與不同屬之間產(chǎn)生變異［２６］。通過對己公布的ＯＲＦＶ基因組全序列進(jìn)行分??析可發(fā)現(xiàn)不同ＯＲＦＶ毒株之間同源性相對較高，這表明ＯＲＦＶ相對保守。但是，由??于ＯＲＦＶ的毒力基因和免疫相關(guān)基因都集中在基因組兩端，由于ＯＲＦＶ基因組兩端??常出現(xiàn)變異，在基因重組的過程中通過獲得宿主基因或缺少非必須基因而產(chǎn)生新毒株??［２７］。據(jù)報道，ＯＲＦＶ通過細(xì)胞多次傳代后，由于末端基因的缺失或重組可導(dǎo)致病毒致??病力降低，因為這些變異區(qū)域為非必須基因，可以被其他外源基因所替換，而許多新??疫苗的開發(fā)也正是利用了這一點Ｍ。??Ｉ?一?Ｉ??ＩＴＲ?Ｊ＜?編碼區(qū)?＞１?ＩＴＲ??Ｚ丨?—?＼??＾????????、??〇ｆｉ＾ｓ??Ｔ＊ｎｕｉｎ￡ｌ?ｙｔｍｓｔｉｏｎ?ｒｅｅｔｏｎ?Ｃｅｉａｔｉｓｌ?ｃｏｎ?ｓｅｉｚｅｄ?ｒｅｇｉｏｎ?Ｔｅｍｉｉｕｓｌ?ｒｅｅｉｏｎ??圖２羊口瘡病毒的基因組結(jié)構(gòu)示意圖（引閆豐超等，２０１３）??Ｆｉｇ．２?Ｉ?ｈｅ?ｓ

１４?不同宿主來源的ＯＲＦＶ免疫相關(guān)基因的比較分析???３結(jié)果??３．１強毒株、９０代毒株與駱駝ＯＲＦＶ免疫相關(guān)基因的擴增結(jié)果??用設(shè)計好的特異性引物（見表２?）分別對ＯＲＦＶ／ＱＤ／Ｙ、ＯＲＦＶ／ＲＤ／Ｙ和??ＯＲＦＶ／ＱＤ／ＬＴ的Ｂ２Ｌ基因、Ｆ１Ｌ基因和ＶＩＲ基因進(jìn)行ＰＣＲ擴增，分別擴增出單一清??晰條帶，且片段大小與預(yù)期一致，如圖３？圖５。??Ｍ?１?２?３?４?５?Ｍ?１?２?３?４?５?Ｍ?１?２?３?４?５??２ＧＣ３Ｌ－Ｍ＇＇?＇?７５：：ｂｐＥｆｃ?＾?２０：：ｂｐＫ?，?．＂＾１??：ｒ：＇：：?：：，：．．：?…１．ｉ：：＇：?－：；ｉ??，ＨＢ?■卿■??圖３?Ｂ２Ｌ基因ＰＣＲ擴增結(jié)果?圖４?Ｆ１Ｌ基因ＰＣＲ擴增結(jié)果?圖５?ＶＩＲ基因ＰＣＲ擴增結(jié)果??Ｍ：ＤＬ５０００ＤＭＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：?Ｍ：ＤＬ２０００?ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：?Ｍ：ＤＬ５０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；?１?？５：??ＰＣＲ產(chǎn)物；４：陰性對照；５：陽?ＰＣＲ產(chǎn)物；４：陰性對照；５：陽?ＰＣＲ產(chǎn)物；４：陰性對照；５：陽??性對照?性對照?性對照??Ｆｉｇ．３?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｂ２Ｌ?ｇｅｎｅ?Ｆｉｇ．４?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｆ１Ｌ?ｇｅｎｅ?Ｆｉｇ－５?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＶＩＲ?ｇｅｎｅ??ＰＣＲ?ＰＣＲ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡＭａｉ．ｋｅｒ：?１?？５：?Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１?？５：?Ｍ：?ＤＬ５０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ：?１?？５：??ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?；?４?：?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ＰＣＲ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]羊口瘡病毒的致弱與滅活苗的初步研究[D]. 李娜.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
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[4]不同地區(qū)羊口瘡病毒三個主要結(jié)構(gòu)蛋白基因的遺傳進(jìn)化分析[D]. 李浩.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[5]羊口瘡病毒的分離鑒定及B2L囊膜蛋白單克隆抗體的制備[D]. 譚強.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2014
[6]富平某奶山羊養(yǎng)殖場羊口瘡分子病原學(xué)調(diào)查及滅活疫苗免疫效果評估[D]. 賈云曉.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[7]羊口瘡病原分子流行病學(xué)調(diào)查及蜂膠佐劑滅活疫苗免疫效果研究[D]. 張立強.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[8]羊口瘡抗體ELISA檢測方法的建立及應(yīng)用[D]. 李杰.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2013
[9]羊口瘡疫苗研制及其免疫效果評估[D]. 田婷婷.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2013



本文編號：3463379