血小板衍生生長因子A（PDGFA）為血小板衍生生長因子之一,可由多種細(xì)胞產(chǎn)生。其可與細(xì)胞膜表面高度特異受體PDGFRA結(jié)合,從而激活PDGF/PDGFR通路,發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)�，F(xiàn)有研究表明PDGFA蛋白在多種癌細(xì)胞的增殖和遷移過程中起重要作用。鹿茸的快速生長和再生是自然界絕無僅有的,也因此成為理想的再生生物學(xué)研究對象。對它快速增殖的研究也可能成為臨床治療腫瘤的新切入點。本研究根據(jù)Genbank中牛的基因序列,設(shè)計了梅花鹿PDGFA基因的同源引物,并在引物兩端分別加入酶切位點（HindⅢ、BamH Ⅰ）。采用RT-PCR技術(shù)獲得了梅花鹿鹿茸組織PDGFA基因cDNA序列,通過對測序結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),獲得的PDGFA基因cDNA序列長663bp,編碼196個氨基酸。經(jīng)對比發(fā)現(xiàn)梅花鹿PDGFA蛋白與白尾鹿、家牛、山羊同源性較高,分別為98%、97%、96%,證明成功克隆了梅花鹿的PDGFA基因。本試驗構(gòu)建pEGFP-C1-PDGFA重組質(zhì)粒,用pEGFP-C1-PDGFA真核表達(dá)載和pEGFP-C1空載體分別瞬時轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,并在熒光顯微鏡下觀察,可見大量綠色熒光,轉(zhuǎn)染效率為60%-70... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＰＤＧＦＡ基因信號通路??Ｆｉｇ?１－１?ＰＤＧＦＡ?ｇｅｎｅ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ??

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???３結(jié)果與分析??３．１梅花鹿鹿茸組織總ＲＮＡ提取結(jié)果??提娶純化鹿茸尖端組織總ＲＮＡ后，對ＲＮＡ樣品進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示（見圖３－??１），２８Ｓ和１８Ｓ條帶明亮清晰，２８ｓ亮度更高，測量產(chǎn)物ＯＤ２６〇／２８〇值，結(jié)果均在１．８－２．０??之間，綜上，證明鹿茸尖端組織總ＲＮＡ提取產(chǎn)物質(zhì)量較好可以使用。??圖３－１總ＲＮＡ的１％瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果??Ｆｉｇ．３－１?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?１％?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??３．２梅花鹿ＰＤＧＦＡ基因克隆及酶切鑒定??３．２．１?ＰＤＧＦＡ基因擴(kuò)增與克隆??１％瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，結(jié)果見圖３－２，在５００ｂｐ－７５０ｂｐ之間發(fā)現(xiàn)明亮條??帶，與對目的片段的預(yù)期大小相符。使用ＰＭＤ１８－Ｔ載體連接純化回收后的目的片段，??轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞中大量克隆，陽性ＰＣＲ檢測菌液，菌液ＰＣＲ擴(kuò)増產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示??條帶大小與預(yù)期相符（見圖３－３），與ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物大小相同，成功獲得大量目的片??段。選擇菌液ＰＣＲ條帶清晰，明亮的菌液，送往生物公司測序。??Ｍ?１??獅■??１麵｜：…麵義??：斷“??ａ?ｓｏ?１１—??圖３－２?ＰＤＧＦＡ基因擴(kuò)增產(chǎn)物??Ｍ：?ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＤＧＦＡ?基因擴(kuò)增產(chǎn)物??Ｆｉｇ．３－２?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＰＤＧＦＡ?ｇｅｎｅ??Ｍ：?ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１?：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＰＤＧＦＡ?ｇｅｎｅ??－１８－??

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???３結(jié)果與分析??３．１梅花鹿鹿茸組織總ＲＮＡ提取結(jié)果??提娶純化鹿茸尖端組織總ＲＮＡ后，對ＲＮＡ樣品進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示（見圖３－??１），２８Ｓ和１８Ｓ條帶明亮清晰，２８ｓ亮度更高，測量產(chǎn)物ＯＤ２６〇／２８〇值，結(jié)果均在１．８－２．０??之間，綜上，證明鹿茸尖端組織總ＲＮＡ提取產(chǎn)物質(zhì)量較好可以使用。??圖３－１總ＲＮＡ的１％瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果??Ｆｉｇ．３－１?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?１％?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??３．２梅花鹿ＰＤＧＦＡ基因克隆及酶切鑒定??３．２．１?ＰＤＧＦＡ基因擴(kuò)增與克隆??１％瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，結(jié)果見圖３－２，在５００ｂｐ－７５０ｂｐ之間發(fā)現(xiàn)明亮條??帶，與對目的片段的預(yù)期大小相符。使用ＰＭＤ１８－Ｔ載體連接純化回收后的目的片段，??轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞中大量克隆，陽性ＰＣＲ檢測菌液，菌液ＰＣＲ擴(kuò)増產(chǎn)物電泳結(jié)果顯示??條帶大小與預(yù)期相符（見圖３－３），與ＰＣＲ擴(kuò)增產(chǎn)物大小相同，成功獲得大量目的片??段。選擇菌液ＰＣＲ條帶清晰，明亮的菌液，送往生物公司測序。??Ｍ?１??獅■??１麵｜：…麵義??：斷“??ａ?ｓｏ?１１—??圖３－２?ＰＤＧＦＡ基因擴(kuò)增產(chǎn)物??Ｍ：?ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１：?ＰＤＧＦＡ?基因擴(kuò)增產(chǎn)物??Ｆｉｇ．３－２?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＰＤＧＦＡ?ｇｅｎｅ??Ｍ：?ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ；?１?：?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?ＰＤＧＦＡ?ｇｅｎｅ??－１８－??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雌雄馴鹿茸頂端茸皮組織PDGFA基因克隆及表達(dá)分析[J]. 韓磊,韓若冰,王強(qiáng)輝,翟健程,李和平.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020(01)
[2]RanBPM調(diào)控IFN-λR1-STAT5通路分子機(jī)制研究[J]. 張俊文,趙喬佳杰,楊霞,馬雯,黃秉仁,劉福生.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2019 (08)
[3]脂質(zhì)體和慢病毒介導(dǎo)P75神經(jīng)生長因子受體及神經(jīng)生長因子轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的效果比較[J]. 朱倫井,貝朝涌,段江濤,彭稱飛,馬躍剛,王寧,陳俊毅.  中國組織工程研究. 2019(21)
[4]MAPK/ERK信號通路參與褪黑素對阿爾茨海默病大鼠小腦的神經(jīng)保護(hù)作用[J]. 劉亭,畢竟,王盼,任麗莉,張露允,隋汝波.  中國藥理學(xué)通報. 2019(03)
[5]Twist通過ERK通路對體外鼻咽癌細(xì)胞血管生成的影響[J]. 孫旭鴦,陳湧.  中國病理生理雜志. 2019(02)
[6]活血散結(jié)方藥物血漿對PDGF干預(yù)下兔視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞增殖相關(guān)因子及ERK1/2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響[J]. 劉曉清,彭俊,張又瑋,譚涵宇,李建超,吳權(quán)龍,彭清華.  中國中醫(yī)藥信息雜志. 2019(02)
[7]介導(dǎo)疼痛中樞敏化探討安腸湯對肝郁脾虛型IBS-D大鼠pPKCγ和ERK1在脊髓背角表達(dá)[J]. 黃適,王松,林福旭,劉鵬,林春李,雷力民,趙海燕,黃婷.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2019(02)
[8]脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染犬腎上皮細(xì)胞的方法改進(jìn)與優(yōu)化[J]. 柴百惠,繩秀珍,唐小千,邢婧,戰(zhàn)文斌.  中國海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2018(S2)
[9]半夏瀉心湯對PLGC大鼠胃黏膜P13k/Akt/m TOR通路的影響及其防治研究[J]. 彭雪靖,劉潔.  湖南中醫(yī)雜志. 2018(10)
[10]東北狍PDGFA基因cDNA克隆及表達(dá)分析[J]. 崔薇,苗震,張強(qiáng),高悅禹,夏彥玲.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(19)

博士論文
[1]Shc3通過激活MEK/ERK影響肝細(xì)胞肝癌增殖和轉(zhuǎn)移的研究[D]. 劉赟.天津醫(yī)科大學(xué) 2018
[2]TRPC3調(diào)控PLCγ/PKC/CPI-17信號通路在感染性早產(chǎn)中的作用及機(jī)制研究[D]. 陳靜.中國醫(yī)科大學(xué) 2018
[3]SC99通過Syk/STAT3/PLCγ2信號通路抑制血小板聚集的實驗研究[D]. 徐耑.蘇州大學(xué) 2017
[4]vMIP-ⅡN端肽靶向PDGFRα逆轉(zhuǎn)乳腺癌EMT的機(jī)制研究[D]. 楊清玲.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2017
[5]PDGFRα在人黑素細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用和機(jī)制研究[D]. 黃也.第四軍醫(yī)大學(xué) 2015
[6]細(xì)胞內(nèi)鈣信號對與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的Cav1,Pdgfb以及Ptgs2表達(dá)調(diào)控的研究[D]. 陽曉艷.沈陽藥科大學(xué) 2013
[7]梅花鹿生茸區(qū)骨膜及角柄骨膜在鹿茸生長發(fā)育中作用的研究[D]. 高志光.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2009

碩士論文
[1]三七總皂苷對阿爾茨海默病氧化應(yīng)激PI3K/Akt和PLCγ1/PKC信號通路的影響研究[D]. 田新.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 2016
[2]血管生成素及其受體在梅花鹿茸角中的表達(dá)與調(diào)節(jié)[D]. 張璐.吉林大學(xué) 2012
[3]烏司他丁和泰索帝對人乳腺癌增殖、侵襲、凋亡及PAFR、PDGFA、IGF-1R表達(dá)的影響[D]. 王宏.重慶醫(yī)科大學(xué) 2011
[4]從基因芯片結(jié)果中篩選鼻咽癌信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因及初步驗證[D]. 龔輝成.廣州醫(yī)學(xué)院 2009



本文編號：3463359