牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV）是一種小的單股正鏈RNA病毒,屬于黃病毒科瘟病毒屬的成員。該病毒對(duì)牛的生產(chǎn)性能影響極大,可以引起流產(chǎn)、產(chǎn)出畸形胎兒或者持續(xù)性感染小牛,這對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失。持續(xù)感染的動(dòng)物通常比短暫或急性感染的動(dòng)物更有效地傳播BVDV,因?yàn)樗鼈兡軌蚪K生排毒,并且被認(rèn)為是BVDV的主要宿主。近年來(lái)國(guó)內(nèi)BVDV感染率較高且逐漸上升。此外,我國(guó)進(jìn)口的牛數(shù)量逐漸增加,因此必須加強(qiáng)對(duì)BVDV的檢疫和防控。國(guó)內(nèi)目前在檢測(cè)BVDV血清抗體時(shí)主要是病毒中和試驗(yàn)和商品化試劑盒,但病毒中和試驗(yàn)不適合血清的大規(guī)模檢測(cè),而商品化試劑盒價(jià)格昂貴。為此,本研究開(kāi)展了建立檢測(cè)BVDV血清抗體的間接ELISA方法的研究,為國(guó)內(nèi)BVDV的防控提供技術(shù)支持。BVDV最具免疫原性的蛋白包括結(jié)構(gòu)蛋白E^rns（E0）和E2及非結(jié)構(gòu)蛋白P80,三者均可應(yīng)用于檢測(cè)牛血清中針對(duì)BVDV的抗體。其中E0和E2蛋白是BVDV結(jié)構(gòu)蛋白,是其主要的免疫原,可誘導(dǎo)中和抗體,是抗體檢測(cè)的主要靶標(biāo)。P80蛋白是病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白,具有較強(qiáng)的免疫原性,病... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 牛病毒性腹瀉病毒的概況
        1.1.1 基因分類及遺傳多樣性
        1.1.2 病毒的基因組及編碼的蛋白
    1.2 BVDV的傳染源、傳播途徑及宿主
    1.3 國(guó)內(nèi)外流行情況
    1.4 檢測(cè)
        1.4.1 BVDV特異性抗體檢測(cè)
        1.4.2 抗原/病毒檢測(cè)
    1.5 BVDV感染的防控
    1.6 研究目的及意義
第二章 以BVDV的重組P80 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法的建立及應(yīng)用
    2.1 材料與方法
        2.1.1 病毒、質(zhì)粒和菌種
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 血清樣品
        2.1.4 純化蛋白有關(guān)溶液
        2.1.5 重組蛋白P80的原核表達(dá)和鑒定
        2.1.6 P80重組蛋白的純化
        2.1.7 P80重組蛋白的復(fù)性
        2.1.8 以P80 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法建立
        2.1.9 包被條件的確定
        2.1.10 最佳封閉液和封閉時(shí)間的確定
        2.1.11 血清最佳孵育時(shí)間的確定
        2.1.12 二抗最佳稀釋比例的確定
        2.1.13 二抗最佳孵育時(shí)間的確定
        2.1.14 顯色液的最佳顯色時(shí)間的確定
        2.1.15 臨界值的確定
        2.1.16 特異性試驗(yàn)
        2.1.17 敏感性試驗(yàn)
        2.1.18 重復(fù)性試驗(yàn)
        2.1.19 與病毒中和試驗(yàn)的符合率試驗(yàn)
        2.1.20 牛血清樣品的檢測(cè)
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 重組P80蛋白的原核表達(dá)鑒定及純化
        2.2.2 方陣滴定
        2.2.3 包被條件的優(yōu)化
        2.2.4 封閉條件的優(yōu)化
        2.2.5 血清的最佳作用時(shí)間
        2.2.6 二抗最佳稀釋比例的確定
        2.2.7 二抗最佳孵育時(shí)間的確定
        2.2.8 顯色液的最佳顯色時(shí)間的確定
        2.2.9 臨界值的確定
        2.2.10 特異性試驗(yàn)結(jié)果
        2.2.11 敏感性試驗(yàn)
        2.2.12 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        2.2.13 與病毒中和試驗(yàn)的符合率
        2.2.14 建立的間接ELISA方法的初步應(yīng)用
    2.3 討論
第三章 以BVDV的重組E2 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法的建立及應(yīng)用
    3.1 材料與方法
        3.1.1 病毒、質(zhì)粒和菌種
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 血清樣品
        3.1.4 純化蛋白有關(guān)溶液
        3.1.5 原核表達(dá)和鑒定重組蛋白E2
        3.1.6 E2重組蛋白的純化
        3.1.7 E2重組蛋白的復(fù)性
        3.1.8 以E2 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法建立
        3.1.9 包被條件的確定
        3.1.10 封閉液和封閉時(shí)間的確定
        3.1.11 血清最佳孵育時(shí)間的確定
        3.1.12 二抗最佳稀釋比例的確定
        3.1.13 確定二抗最佳孵育時(shí)間
        3.1.14 最佳顯色時(shí)間的確定
        3.1.15 臨界值的確定
        3.1.16 特異性試驗(yàn)
        3.1.17 敏感性試驗(yàn)
        3.1.18 重復(fù)性試驗(yàn)
        3.1.19 與病毒中和試驗(yàn)的符合率試驗(yàn)
        3.1.20 牛血清樣品的檢測(cè)
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 重組E2蛋白的原核表達(dá)鑒定及純化
        3.2.2 方陣滴定
        3.2.3 優(yōu)化包被條件
        3.2.4 封閉條件的優(yōu)化
        3.2.5 血清的最佳作用時(shí)間
        3.2.6 二抗最佳稀釋比例的確定
        3.2.7 二抗最佳孵育時(shí)間的確定
        3.2.8 顯色液的最佳顯色時(shí)間的確定
        3.2.9 臨界值的確定
        3.2.10 特異性試驗(yàn)結(jié)果
        3.2.11 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
        3.2.12 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        3.2.13 與病毒中和試驗(yàn)的符合率
        3.2.14 牛血清現(xiàn)地樣品的檢測(cè)結(jié)果
    3.3 討論
第四章 以BVDV的重組E0 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法的建立及應(yīng)用
    4.1 材料與方法
        4.1.1 病毒、質(zhì)粒和菌種
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 血清樣品
        4.1.4 純化蛋白有關(guān)溶液
        4.1.5 重組蛋白E0的原核表達(dá)和鑒定
        4.1.6 E0重組蛋白的純化
        4.1.7 E0重組蛋白的復(fù)性
        4.1.8 以E0 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法建立
        4.1.9 包被條件的確定
        4.1.10 最佳封閉液和封閉時(shí)間的確定
        4.1.11 血清最佳孵育時(shí)間的確定
        4.1.12 二抗最佳稀釋比例的確定
        4.1.13 確定二抗最佳孵育時(shí)間
        4.1.14 顯色液的最佳顯色時(shí)間的確定
        4.1.15 臨界值的確定
        4.1.16 特異性試驗(yàn)
        4.1.17 敏感性試驗(yàn)
        4.1.18 重復(fù)性試驗(yàn)
        4.1.19 與病毒中和試驗(yàn)的符合率試驗(yàn)
        4.1.20 牛血清樣品的檢測(cè)
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 重組E0蛋白的原核表達(dá)鑒定及純化
        4.2.2 方陣滴定
        4.2.3 優(yōu)化包被條件
        4.2.4 封閉條件的優(yōu)化
        4.2.5 血清的最佳作用時(shí)間
        4.2.6 二抗最佳稀釋比例的確定
        4.2.7 確定二抗的最佳孵育時(shí)間
        4.2.8 顯色液的最佳顯色時(shí)間的確定
        4.2.9 臨界值的確定
        4.2.10 特異性試驗(yàn)結(jié)果
        4.2.11 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
        4.2.12 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
        4.2.13 與病毒中和試驗(yàn)的符合率
        4.2.14 牛血清現(xiàn)地樣品的檢測(cè)結(jié)果
    4.3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3461299