發(fā)布時間：2021-10-27 09:11

　　牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV）是一種小的單股正鏈RNA病毒,屬于黃病毒科瘟病毒屬的成員。該病毒對牛的生產(chǎn)性能影響極大,可以引起流產(chǎn)、產(chǎn)出畸形胎兒或者持續(xù)性感染小牛,這對養(yǎng)牛業(yè)造成了極大的經(jīng)濟損失。持續(xù)感染的動物通常比短暫或急性感染的動物更有效地傳播BVDV,因為它們能夠終生排毒,并且被認為是BVDV的主要宿主。近年來國內(nèi)BVDV感染率較高且逐漸上升。此外,我國進口的牛數(shù)量逐漸增加,因此必須加強對BVDV的檢疫和防控。國內(nèi)目前在檢測BVDV血清抗體時主要是病毒中和試驗和商品化試劑盒,但病毒中和試驗不適合血清的大規(guī)模檢測,而商品化試劑盒價格昂貴。為此,本研究開展了建立檢測BVDV血清抗體的間接ELISA方法的研究,為國內(nèi)BVDV的防控提供技術(shù)支持。BVDV最具免疫原性的蛋白包括結(jié)構(gòu)蛋白E^rns（E0）和E2及非結(jié)構(gòu)蛋白P80,三者均可應用于檢測牛血清中針對BVDV的抗體。其中E0和E2蛋白是BVDV結(jié)構(gòu)蛋白,是其主要的免疫原,可誘導中和抗體,是抗體檢測的主要靶標。P80蛋白是病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白,具有較強的免疫原性,病... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 牛病毒性腹瀉病毒的概況
        1.1.1 基因分類及遺傳多樣性
        1.1.2 病毒的基因組及編碼的蛋白
    1.2 BVDV的傳染源、傳播途徑及宿主
    1.3 國內(nèi)外流行情況
    1.4 檢測
        1.4.1 BVDV特異性抗體檢測
        1.4.2 抗原/病毒檢測
    1.5 BVDV感染的防控
    1.6 研究目的及意義
第二章 以BVDV的重組P80 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法的建立及應用
    2.1 材料與方法
        2.1.1 病毒、質(zhì)粒和菌種
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 血清樣品
        2.1.4 純化蛋白有關(guān)溶液
        2.1.5 重組蛋白P80的原核表達和鑒定
        2.1.6 P80重組蛋白的純化
        2.1.7 P80重組蛋白的復性
        2.1.8 以P80 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法建立
        2.1.9 包被條件的確定
        2.1.10 最佳封閉液和封閉時間的確定
        2.1.11 血清最佳孵育時間的確定
        2.1.12 二抗最佳稀釋比例的確定
        2.1.13 二抗最佳孵育時間的確定
        2.1.14 顯色液的最佳顯色時間的確定
        2.1.15 臨界值的確定
        2.1.16 特異性試驗
        2.1.17 敏感性試驗
        2.1.18 重復性試驗
        2.1.19 與病毒中和試驗的符合率試驗
        2.1.20 牛血清樣品的檢測
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 重組P80蛋白的原核表達鑒定及純化
        2.2.2 方陣滴定
        2.2.3 包被條件的優(yōu)化
        2.2.4 封閉條件的優(yōu)化
        2.2.5 血清的最佳作用時間
        2.2.6 二抗最佳稀釋比例的確定
        2.2.7 二抗最佳孵育時間的確定
        2.2.8 顯色液的最佳顯色時間的確定
        2.2.9 臨界值的確定
        2.2.10 特異性試驗結(jié)果
        2.2.11 敏感性試驗
        2.2.12 重復性試驗結(jié)果
        2.2.13 與病毒中和試驗的符合率
        2.2.14 建立的間接ELISA方法的初步應用
    2.3 討論
第三章 以BVDV的重組E2 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法的建立及應用
    3.1 材料與方法
        3.1.1 病毒、質(zhì)粒和菌種
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 血清樣品
        3.1.4 純化蛋白有關(guān)溶液
        3.1.5 原核表達和鑒定重組蛋白E2
        3.1.6 E2重組蛋白的純化
        3.1.7 E2重組蛋白的復性
        3.1.8 以E2 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法建立
        3.1.9 包被條件的確定
        3.1.10 封閉液和封閉時間的確定
        3.1.11 血清最佳孵育時間的確定
        3.1.12 二抗最佳稀釋比例的確定
        3.1.13 確定二抗最佳孵育時間
        3.1.14 最佳顯色時間的確定
        3.1.15 臨界值的確定
        3.1.16 特異性試驗
        3.1.17 敏感性試驗
        3.1.18 重復性試驗
        3.1.19 與病毒中和試驗的符合率試驗
        3.1.20 牛血清樣品的檢測
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 重組E2蛋白的原核表達鑒定及純化
        3.2.2 方陣滴定
        3.2.3 優(yōu)化包被條件
        3.2.4 封閉條件的優(yōu)化
        3.2.5 血清的最佳作用時間
        3.2.6 二抗最佳稀釋比例的確定
        3.2.7 二抗最佳孵育時間的確定
        3.2.8 顯色液的最佳顯色時間的確定
        3.2.9 臨界值的確定
        3.2.10 特異性試驗結(jié)果
        3.2.11 敏感性試驗結(jié)果
        3.2.12 重復性試驗結(jié)果
        3.2.13 與病毒中和試驗的符合率
        3.2.14 牛血清現(xiàn)地樣品的檢測結(jié)果
    3.3 討論
第四章 以BVDV的重組E0 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法的建立及應用
    4.1 材料與方法
        4.1.1 病毒、質(zhì)粒和菌種
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 血清樣品
        4.1.4 純化蛋白有關(guān)溶液
        4.1.5 重組蛋白E0的原核表達和鑒定
        4.1.6 E0重組蛋白的純化
        4.1.7 E0重組蛋白的復性
        4.1.8 以E0 蛋白作為包被抗原的間接ELISA方法建立
        4.1.9 包被條件的確定
        4.1.10 最佳封閉液和封閉時間的確定
        4.1.11 血清最佳孵育時間的確定
        4.1.12 二抗最佳稀釋比例的確定
        4.1.13 確定二抗最佳孵育時間
        4.1.14 顯色液的最佳顯色時間的確定
        4.1.15 臨界值的確定
        4.1.16 特異性試驗
        4.1.17 敏感性試驗
        4.1.18 重復性試驗
        4.1.19 與病毒中和試驗的符合率試驗
        4.1.20 牛血清樣品的檢測
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 重組E0蛋白的原核表達鑒定及純化
        4.2.2 方陣滴定
        4.2.3 優(yōu)化包被條件
        4.2.4 封閉條件的優(yōu)化
        4.2.5 血清的最佳作用時間
        4.2.6 二抗最佳稀釋比例的確定
        4.2.7 確定二抗的最佳孵育時間
        4.2.8 顯色液的最佳顯色時間的確定
        4.2.9 臨界值的確定
        4.2.10 特異性試驗結(jié)果
        4.2.11 敏感性試驗結(jié)果
        4.2.12 重復性試驗結(jié)果
        4.2.13 與病毒中和試驗的符合率
        4.2.14 牛血清現(xiàn)地樣品的檢測結(jié)果
    4.3 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：3461299