豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus, PRRSV）引起的，以母豬繁殖障礙（流產、死產、弱胎、木乃伊胎）以及仔豬的呼吸道癥狀和高死亡率為主要特征的一種新型傳染病。該病1987年首次在美國發(fā)生，1990年首次在荷蘭從肺泡巨噬細胞中分離到病原，之后在德國、西班牙、英國、法國、丹麥等國家也先后報道發(fā)生該病。1996年郭寶清等人用間接免疫熒光法首次證實本病在國內存在。PRSSV有2個血清型，美洲型和歐洲型，我國爆發(fā)的主要以美洲型為主。為了檢測地方品種豬對PRRSV的耐受性及病毒在體內的增殖規(guī)律，15頭經RT-PCR檢測為PRRSV抗原陰性和ELISA檢測為PRRSV抗體陰性的30日齡健康萊蕪黑豬仔豬，隨機分為2組，攻毒組10頭，對照組5頭，分別人工鼻腔接種1mL/頭（104TCID50/mL）PRRSV液和PBS。分別于感染后觀察攻毒豬的臨床癥狀，并于第3d、7d、14d、21d... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 病原學特征
        1.1.1 PRRSV 分類
        1.1.2 PRRSV 的理化特性
        1.1.3 PRRSV 的細胞增殖特性
    1.2 PRRSV 分子生物學特征
        1.2.1 PRRSV 基因組結構
        1.2.2 PRRSV 的蛋白質
    1.3 國內外研究進展
    1.4 PRRSV 檢測方法研究進展
    1.5 PRRSV 與免疫學
        1.5.1 PRRSV 與體液免疫
        1.5.2 PRRSV 與細胞免疫
        1.5.3 細胞因子的產生
    1.6 PRRSV 致病機理與臨床癥狀
        1.6.1 臨床癥狀
    1.7 PRRSV 在體內分布規(guī)律
    1.8 PRRSV 與細胞受體
    1.9 本研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 仔豬與攻毒場所
        2.1.3 酶類與試劑
        2.1.4 主要試劑配制
        2.1.5 主要設備及儀器
    2.2 方法
        2.2.1 實驗設計
        2.2.2 PRRSV、PCV2、PRV、CSFV 抗體檢測 ELISA 法
        2.2.3 引物及探針的設計與合成
        2.2.4 陽性標準品的制備
        2.2.5 熒光定量 PCR 方法的構建
        2.2.6 絕對熒光定量 PCR 方法的應用
        2.2.7 相對熒光定量 PCR 方法的建立
        2.2.8 數(shù)據分析
3 結果與分析
    3.1 萊蕪黑豬攻毒后的臨床癥狀及病理變化
        3.1.1 臨床癥狀觀察
        3.1.2 剖檢病理變化
        3.1.3 體溫變化規(guī)律
    3.2 PRRSV 熒光定量 RT-PCR 檢測方法的建立
        3.2.1 RT-PCR 擴增結果
        3.2.2 重組質粒酶切鑒定
        3.2.3 優(yōu)化熒光定量 PCR 反應體系與反應程序
        3.2.4 標準曲線的建立
        3.2.5 靈敏性檢測性
        3.2.6 特異性檢測
        3.2.7 重復性檢測
    3.3 萊蕪黑豬攻毒后體內各器官的 PRRSV 載量檢測
        3.3.1 各實質臟器病毒載量變化
        3.3.2 各免疫器官中病毒載量變化
        3.3.3 各個組織中病毒載量攻毒后柱狀圖
    3.4 PRRSV 受體檢測相對相對熒光定量 PCR 檢測方法的建立
        3.4.1 檢測各種受體的相對熒光定量 PCR 的擴增效率
        3.4.2 相對熒光定量 PCR 特異性、重復性試驗
        3.4.3 各組織中病毒、受體及管家基因擴增曲線
    3.5 萊蕪黑豬攻毒后個組織中 PRRSV 受體相對表達量檢測
        3.5.1 攻毒后第 3d 組織中受體相對表達量
        3.5.2 攻毒后第 7d 組織中受體相對表達量
        3.5.3 攻毒后第 14d 組織中受體相對表達量
        3.5.4 攻毒后第 21d 組織中受體相對表達量
        3.5.5 攻毒后第 28d 組織中受體相對表達量
4 討論
5 結論
6 參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況



本文編號：3460655