發(fā)布時(shí)間：2021-10-27 02:06

　　豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus, PRRSV）引起的，以母豬繁殖障礙（流產(chǎn)、死產(chǎn)、弱胎、木乃伊胎）以及仔豬的呼吸道癥狀和高死亡率為主要特征的一種新型傳染病。該病1987年首次在美國發(fā)生，1990年首次在荷蘭從肺泡巨噬細(xì)胞中分離到病原，之后在德國、西班牙、英國、法國、丹麥等國家也先后報(bào)道發(fā)生該病。1996年郭寶清等人用間接免疫熒光法首次證實(shí)本病在國內(nèi)存在。PRSSV有2個(gè)血清型，美洲型和歐洲型，我國爆發(fā)的主要以美洲型為主。為了檢測(cè)地方品種豬對(duì)PRRSV的耐受性及病毒在體內(nèi)的增殖規(guī)律，15頭經(jīng)RT-PCR檢測(cè)為PRRSV抗原陰性和ELISA檢測(cè)為PRRSV抗體陰性的30日齡健康萊蕪黑豬仔豬，隨機(jī)分為2組，攻毒組10頭，對(duì)照組5頭，分別人工鼻腔接種1mL/頭（104TCID50/mL）PRRSV液和PBS。分別于感染后觀察攻毒豬的臨床癥狀，并于第3d、7d、14d、21d... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)說明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 病原學(xué)特征
        1.1.1 PRRSV 分類
        1.1.2 PRRSV 的理化特性
        1.1.3 PRRSV 的細(xì)胞增殖特性
    1.2 PRRSV 分子生物學(xué)特征
        1.2.1 PRRSV 基因組結(jié)構(gòu)
        1.2.2 PRRSV 的蛋白質(zhì)
    1.3 國內(nèi)外研究進(jìn)展
    1.4 PRRSV 檢測(cè)方法研究進(jìn)展
    1.5 PRRSV 與免疫學(xué)
        1.5.1 PRRSV 與體液免疫
        1.5.2 PRRSV 與細(xì)胞免疫
        1.5.3 細(xì)胞因子的產(chǎn)生
    1.6 PRRSV 致病機(jī)理與臨床癥狀
        1.6.1 臨床癥狀
    1.7 PRRSV 在體內(nèi)分布規(guī)律
    1.8 PRRSV 與細(xì)胞受體
    1.9 本研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 仔豬與攻毒場(chǎng)所
        2.1.3 酶類與試劑
        2.1.4 主要試劑配制
        2.1.5 主要設(shè)備及儀器
    2.2 方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.2.2 PRRSV、PCV2、PRV、CSFV 抗體檢測(cè) ELISA 法
        2.2.3 引物及探針的設(shè)計(jì)與合成
        2.2.4 陽性標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        2.2.5 熒光定量 PCR 方法的構(gòu)建
        2.2.6 絕對(duì)熒光定量 PCR 方法的應(yīng)用
        2.2.7 相對(duì)熒光定量 PCR 方法的建立
        2.2.8 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 萊蕪黑豬攻毒后的臨床癥狀及病理變化
        3.1.1 臨床癥狀觀察
        3.1.2 剖檢病理變化
        3.1.3 體溫變化規(guī)律
    3.2 PRRSV 熒光定量 RT-PCR 檢測(cè)方法的建立
        3.2.1 RT-PCR 擴(kuò)增結(jié)果
        3.2.2 重組質(zhì)粒酶切鑒定
        3.2.3 優(yōu)化熒光定量 PCR 反應(yīng)體系與反應(yīng)程序
        3.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.2.5 靈敏性檢測(cè)性
        3.2.6 特異性檢測(cè)
        3.2.7 重復(fù)性檢測(cè)
    3.3 萊蕪黑豬攻毒后體內(nèi)各器官的 PRRSV 載量檢測(cè)
        3.3.1 各實(shí)質(zhì)臟器病毒載量變化
        3.3.2 各免疫器官中病毒載量變化
        3.3.3 各個(gè)組織中病毒載量攻毒后柱狀圖
    3.4 PRRSV 受體檢測(cè)相對(duì)相對(duì)熒光定量 PCR 檢測(cè)方法的建立
        3.4.1 檢測(cè)各種受體的相對(duì)熒光定量 PCR 的擴(kuò)增效率
        3.4.2 相對(duì)熒光定量 PCR 特異性、重復(fù)性試驗(yàn)
        3.4.3 各組織中病毒、受體及管家基因擴(kuò)增曲線
    3.5 萊蕪黑豬攻毒后個(gè)組織中 PRRSV 受體相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)
        3.5.1 攻毒后第 3d 組織中受體相對(duì)表達(dá)量
        3.5.2 攻毒后第 7d 組織中受體相對(duì)表達(dá)量
        3.5.3 攻毒后第 14d 組織中受體相對(duì)表達(dá)量
        3.5.4 攻毒后第 21d 組織中受體相對(duì)表達(dá)量
        3.5.5 攻毒后第 28d 組織中受體相對(duì)表達(dá)量
4 討論
5 結(jié)論
6 參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3460655