為建立火雞組織滴蟲的檢測方法,本研究采用PCR擴增火雞組織滴蟲的18S rRNA基因片段,構建質粒標準品作為模板,建立火雞組織滴蟲的SYBR Green I熒光定量PCR檢測方法,并進行了初步臨床應用。結果顯示:所建立的SYBR Green I熒光定量PCR檢測方法Cq值與質粒標準品在4.6×10⁶拷貝/μL～4.6×10¹⁰拷貝/μL范圍內呈良好的線性關系,相關系數(shù)為0.9939,斜率為-3.32;該方法對弓形蟲、柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、犬巴貝斯蟲等常見原蟲基因組DNA無擴增,對質粒標準品的檢測下限可達4.6×10²拷貝/μL,組內和組間變異系數(shù)分別為0.09%～0.33%和0.08%～0.21%,敏感性、特異性和重復性均較好。該方法對147份臨床疑似火雞組織滴蟲感染樣品的蟲體總檢出率高于普通PCR方法,其中對靶器官肝臟和盲腸的檢出率（71.4%、66.7%）明顯高于普通PCR方法的檢出率（57.1%、52.4%）。本研究建立的火雞組織滴蟲SYBR Green I熒光定量PCR檢測方法為臨床開展組織滴蟲病的診斷... 

【文章來源】：中國預防獸醫(yī)學報. 2020,42(10)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

重組質粒的酶切鑒定結果

根據(jù)檢測結果建立熒光定量PCR的標準曲線（圖2A）與熔解曲線（圖2B）。結果顯示當質粒濃度為4.6×106拷貝/μL～4.6×1010拷貝/μL時，其與Cq值的線性關系最佳（圖2）。Cq值和標準品拷貝數(shù)（q）之間的線性關系表達式：Cq=-3.32log10(q)+58.19,R2=0.9939,Error=0.369,E=2.001。2.4 特異性試驗結果

特異性試驗結果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]黃羽肉雞實驗性感染火雞組織滴蟲后體內蟲體的動態(tài)分布[J]. 孔令明,禚振男,郭平,曲昌寶,王子靜,劉丹丹,陶建平,許金俊.  中國預防獸醫(yī)學報. 2019(07)
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碩士論文
[1]禽組織滴蟲病流行病學調查及其分子生物學診斷方法的建立與應用[D]. 曲昌寶.揚州大學 2014



本文編號：3458585