利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）與pH指示劑結(jié)合的方式建立偽狂犬病病毒（PRV）野毒株的快速檢測方法,并優(yōu)化反應(yīng)體系。結(jié)果顯示,該方法特異性良好、敏感性較高,檢測限達(dá)100.5TCID50,與熒光定量PCR的敏感性一致。對52份臨床樣品進(jìn)行檢測,用熒光定量PCR檢測出30份陽性樣品,LAMP檢測出27份陽性樣品,二者的符合率為94.2%。結(jié)果表明,PRV野毒株新型可視化LAMP檢測方法操作簡便、結(jié)果判別明顯、檢測成本低,可預(yù)期應(yīng)用于PRV帶毒豬的快速篩查,這對于豬偽狂犬病的凈化具有重要意義。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

LAMP的擴(kuò)增結(jié)果

LAMP的特異性試驗(yàn)

顯。本研究中建立的新型可視化LAMP檢測方法的陽性結(jié)果為黃色，陰性結(jié)果為紫紅色，檢測結(jié)果直觀且容易分辨。其靈敏度和熒光定量PCR一致，檢測限可以達(dá)到100.5TCID50。采用本研究中建立的方法與熒光定量PCR分別對52份臨床樣品進(jìn)行檢測，二者的符合率為94.2％。其中，LAMP檢測結(jié)果為假陰性的樣品的Ct值分別為37.43、37.19、37.67，這3個(gè)樣品屬于弱陽性。本研究中建立的豬偽狂犬病病毒野毒株新型可視化LAMP快速檢測方法可預(yù)期應(yīng)用于PRV帶毒豬的快速篩查，這對于豬偽狂犬病的凈化具有重要意義。12345678圖3LAMP的敏感性試驗(yàn)Figure3ThesensitivitytestofLAMP1～7：105.5、104.5、103.5、102.5、101.5、100.5、10-0.5TCID50；8：陰性對照。1—7：105.5，104.5，103.5，102.5，101.5，100.5，10-0.5TCID50；8：Negativecontrol.10.2649.2648.2647.2646.2645.2644.2643.2642.2641.2640.264熒光強(qiáng)度Fluorescence（533-580）12345651015202530354045循環(huán)數(shù)Cycles78檢測結(jié)果ResultLAMP熒光定量PCRQuantitativePCR陽性數(shù)Positivecounts1720陰性數(shù)Negativecounts3532總計(jì)Total5252參考文獻(xiàn)（References）［1］高澤文，范桂芳，趙婷婷，等.豬偽狂犬病病毒流行株遺傳進(jìn)化及序列比對分析［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2018，38（1）：1-10.GAOZe-wen，F(xiàn)ANGui-fang，ZHAOTing-ting，etal.Phy-logeneticandsequencealignmentanalysisofepi-demicswinepseudorabiesvirus［J］.ChineseJournalofVeterinaryScience，2018，38（1）：1-10.（inChi-nese）［2］龍曉婷，劉俊磊，郭洪，等.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小反芻獸疫病毒環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測方法的建立[J]. 徐瀅,郝玉青,付明哲,張琪,李勤凡,許信剛.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2019(03)
[2]豬偽狂犬病病毒流行株遺傳進(jìn)化及序列比對分析[J]. 高澤文,范桂芳,趙婷婷,徐守興,吳斌.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(01)
[3]犬副流感病毒反轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測方法的建立[J]. 王鳳雪,程世鵬,溫永俊.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2016(04)
[4]腸出血性大腸桿菌O157∶H7 LAMP-LFD快速檢測方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 王利麗,張莉,李秀麗,任衛(wèi)科,池晶晶,楊春蕾,鄢明華.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2015(08)
[5]可視化LAMP快速檢測豬偽狂犬病毒[J]. 王樹芬,王德國,薛白,李學(xué)伍,趙東,張改平.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(06)
[6]豬偽狂犬病病毒環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測方法的建立[J]. 張莉,鄢明華,王東,鮑士國,韓偉,任衛(wèi)科.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2011(07)
[7]偽狂犬病毒在潛伏感染豬體內(nèi)的組織分布[J]. 龍曉婷,劉俊磊,郭洪,習(xí)楊,邱德新,陳煥春,周銳.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2008(05)
[8]偽狂犬病病毒潛伏感染的研究[J]. 懷濟(jì)森,陳煥春.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 1997(03)



本文編號：3458312