發(fā)布時間：2021-10-25 12:00

　　免疫排斥反應(yīng)是限制異種器官移植的主要因素,本研究以獲得α-1,3-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶基因（α-1,3-galactosyltransferase, GGTA1）敲除的巴馬小型豬（Sus scrofa）和GGTA1、β1,4 N-乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶（β1, 4N-acetylgalactosaminyl transferase,β4GalNT2）雙基因敲除的巴馬小型豬為基礎(chǔ),篩選低免疫原性群體。通過分離獲得的不同基因型豬外周血單核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）與過異硫氰酸熒光素標(biāo)記的植物凝集素（fluorescein isothiocyanate-griffonia simplicifolia isolectin B4, FITC-GSIB4）和雙花扁豆凝集素（fluorescein isothiocyanate conjugated Dolichos bliflorus agglutinin, FITC-DBA）共孵育,檢測GGTA1基因和β4GalNT2基因的表達(dá)情況;檢測血液生理、生化指標(biāo),評估GGTA1/β4GalNT2雙基因敲... 

【文章來源】：農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2020,28(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

熒光顯微鏡下不同類型細(xì)胞GSIB4染色結(jié)果(Bar=100μm)

熒光顯微鏡下不同類型細(xì)胞DBA染色結(jié)果(Bar=100μm)

ABO人血型系統(tǒng)血清共孵育實驗中不同血型血清與基因修飾豬PBMC孵育結(jié)果發(fā)現(xiàn)AB型血清的Ig G結(jié)合量最低，AB型血清排除了抗A、抗B凝集素的影響，說明異種器官移植實驗適合用于AB血型受體，后續(xù)血清孵育實驗使用AB血型血清可以進(jìn)一步排除凝集素的影響因素；相比A、B型血清，O型血清Ig G結(jié)合量降低，可能受到豬的AO血型系統(tǒng)的影響和人O型血清中抗A、抗B凝集素的影響，在后續(xù)的相關(guān)實驗中O型血清不適用于血清孵育實驗(Yamamoto et al.,2001;PadlerKaravani,Varki,2011;Dall"Olio et al.,2014)。人的AB型血清共孵育實驗發(fā)現(xiàn)WT巴馬豬Ig G結(jié)合量最高，說明WT巴馬豬作為異種器官移植供體排斥劇烈，免疫原性高；通過基因編輯后GGTA1/β-4Gal NT2雙基因敲除的巴馬豬Ig G結(jié)合量顯著下降，相關(guān)研究報道了β4Gal NT2基因敲除免疫原性進(jìn)一步降低，可能存在雜合敲除豬的免疫原性進(jìn)一步降低的現(xiàn)象(Serafini-Cessi et al.,1986;Dall"Olio et al.,2014;Zhang et al.,2018;Byrne et al.,2018;Takahiro et al.,2019)。但本研究中存在基因敲除樣本量少、不同巴馬豬的免疫原性個體差異和巴馬小型豬AO血型系統(tǒng)等因素的影響，后續(xù)應(yīng)繼續(xù)擴(kuò)大樣本量和針對不同巴馬小型豬的血型系統(tǒng)進(jìn)行相關(guān)研究。圖4 不同血型的平均免疫熒光強(qiáng)度

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]GGTA1/β4GalNT2雙基因敲除近交系五指山小型豬的建立[J]. 李楚,任雪洋,李琳,厲小雪,金永,張曼玲,劉曉蕊,熊強(qiáng),張立寧,王盈,李榮鳳,楊海元,馮書堂,戴一凡.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2019(06)
[2]異種器官移植免疫生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 宋宗培,郭蝶,蔡志明,牟麗莎.  器官移植. 2018(03)
[3]豬肺異種移植的研究進(jìn)展與發(fā)展方向[J]. 周明,鄧陽陽,戴一凡,蔡志明,牟麗莎.  器官移植. 2017(06)
[4]CRISPR/Cas9介導(dǎo)的β4GalNT2基因敲除豬制備[J]. 唐雨婷,高景波,龍川,杜敏杰,黃林華,潘登科,杜曉華.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2017(10)
[5]神經(jīng)細(xì)胞異種移植的研究進(jìn)展[J]. 張青,周翠冰,戴一凡,蔡志明,牟麗莎.  器官移植. 2017(04)
[6]綠色熒光蛋白在α-1,3半乳糖基轉(zhuǎn)移酶敲除豬組織器官的表達(dá)分析[J]. 李智方,馮沖,紀(jì)慧麗,石寧寧,宋小鳳,趙勤麗,龍川,潘登科,楊小淦.  遺傳. 2015(12)
[7]基因修飾豬作為異種器官移植供體的研究進(jìn)展[J]. 李文玲,鮑磊,肖磊.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報. 2014(09)
[8]豬體外受精胚胎、孤雌激活胚胎以及體細(xì)胞核移植胚胎的體外培養(yǎng)[J]. 張運(yùn)海,潘登科,孫國杰,孫秀柱,李燕,戴蘊(yùn)平,李寧.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2007(03)
[9]異種器官移植的研究進(jìn)展[J]. 胡巖松,袁彥平.  實驗動物科學(xué)與管理. 2001(03)



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