研究旨在建立灘羊肌內(nèi)前體脂肪細胞的體外培養(yǎng)體系,并探討其在誘導(dǎo)分化過程中成脂關(guān)鍵基因的表達規(guī)律。采集10日齡灘羊背最長肌組織,用Ⅱ型膠原酶消化分離肌內(nèi)前體脂肪細胞,進行細胞的原代、傳代培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)觀察,繼而對獲得的細胞進行誘導(dǎo)分化和油紅O染色鑒定。同時,采用qRT-PCR檢測參與前體脂肪細胞成脂分化的關(guān)鍵基因PPARγ、C/EBPα、FAS、aP2、LPL mRNA在誘導(dǎo)第0、2、4、6、8 d的表達水平變化。結(jié)果表明:（1）灘羊原代肌內(nèi)前體脂肪細胞在分離后約4 h時開始貼壁,貼壁的細胞呈現(xiàn)為小梭形與不規(guī)則三角形。經(jīng)過傳代后,細胞成分均一并且貼壁良好,呈現(xiàn)成纖維細胞樣形態(tài);細胞傳代第2～6 d為指數(shù)生長期,其生長曲線近似"S"形;（2）細胞誘導(dǎo)分化第8天時,油紅O染色呈紅色,細胞具有前體脂肪細胞的典型特征;（3）PPARγ和FAS的表達水平在第6天時最高,隨著誘導(dǎo)時間增長PPARγ表達先升高后降低,FAS表達先降低后升高再降低;C/EBPα、aP2和LPL的表達量在第4 d最高,隨著誘導(dǎo)分化時間增長,C/EBPα和LPL表達先升高后降低,aP2表達先升高后降低再升高。 

【文章來源】：家畜生態(tài)學(xué)報. 2020,41(11)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗動物與主要試劑
    1.2 灘羊肌內(nèi)前體脂肪細胞分離培養(yǎng)
    1.3 灘羊肌內(nèi)前體脂肪細胞傳代培養(yǎng)
    1.4 灘羊肌內(nèi)前體脂肪細胞生長曲線的測定
    1.5 灘羊肌內(nèi)前體脂肪細胞誘導(dǎo)分化
    1.6 油紅O染色鑒定及脂肪含量的測定
    1.7 引物設(shè)計及合成
    1.8 實時熒光定量PCR
    1.9 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 前體脂肪細胞的形態(tài)學(xué)觀察
    2.2 誘導(dǎo)分化及油紅O染色鑒定
    2.3 生長曲線
    2.4 脂肪含量測定
    2.5 脂肪相關(guān)基因表達檢測
3 討 論
    3.1 肌內(nèi)前體脂肪細胞分離培養(yǎng)
    3.2 肌內(nèi)前體脂肪細胞生長曲線
    3.3 肌內(nèi)前體脂肪細胞的誘導(dǎo)分化及鑒定
    3.4 肌內(nèi)前體脂肪細胞成脂分化關(guān)鍵基因時序表達
4 結(jié) 論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3457332