鴨病毒性肝炎（DVH）是由鴨肝炎病毒（DHV）引起的雛鴨病死率較高的急性、致死性傳染病。目前我國(guó)流行的DVH病原主要是鴨甲型肝炎病毒（DHAV）,該病毒有3個(gè)血清型,分別為DHAV-1,DHAV-2及DHAV-3。在我國(guó)主要流行的是DHAV-1和DHAV-3,因?yàn)槭忻嫔线�沒有研制成功成品的疫苗,并且國(guó)內(nèi)外都有出現(xiàn)病毒變異株的報(bào)道,所以DVH不能得到有效控制,給我國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)帶來巨大的損失。本研究利用實(shí)驗(yàn)室保存的有His標(biāo)簽pET-30a-VP1-1-221aa質(zhì)粒為模板,設(shè)計(jì)無His標(biāo)簽pET-30a-VP1-1-221aa的引物,并利用原核表達(dá)系統(tǒng)制備無His標(biāo)簽VP1-1-221aa蛋白作為免疫原,對(duì)BALB/c小鼠進(jìn)行免疫,將骨髓瘤SP2/0細(xì)胞與免疫小鼠的脾細(xì)胞進(jìn)行融合,以有His標(biāo)簽VP1-1-221aa蛋白作為檢測(cè)原,利用建立好的I-ELISA方法進(jìn)行檢測(cè),經(jīng)過五次亞克隆篩選,結(jié)果獲得2株（2E11,4F3）能夠穩(wěn)定分泌抗DHAV-3 VP1蛋白的陽性雜交瘤細(xì)胞。單抗亞類鑒定的結(jié)果顯示2E11株單抗為IgG1型,4F3株為IgG2a型,用獲得的2株雜交瘤細(xì)胞制備單抗腹水并測(cè)效價(jià)... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

編碼無His標(biāo)簽DHAV-3-VP1-1-221aa基因片段的PCR擴(kuò)增結(jié)果

的無 His 標(biāo)簽 Rosetta-pET-30a-VP1 His 標(biāo)簽 Rosetta-pET-30a-VP1-1-2etta-pET-30a-VP1-1-221aa 菌體超聲沉s tag Rosetta-pET-30a-VP1-1-221aa b induced by IPTG;3.Without His tag R tag Rosetta-pET-30a-VP1-1-221aa ce His 標(biāo)簽 VP1-1-221aa 重組蛋白sion of VP1-1-221aa recombinan

1:10001:10001:20001:20002.2040.1481.9770.132.100.0941.9210.0981.9060.0711.5220.05510101:40001:40001:80001:80001:160001:160001.0810.0921.9580.1521.5150.1120.7590.071.8560.0971.1770.0760.780.061.250.061.0250.05000000雜交瘤細(xì)胞株篩選及亞克隆好的 I-ELISA 方法對(duì)細(xì)胞上清進(jìn)行兩次檢測(cè)，并對(duì)兩次檢測(cè)均為克隆，經(jīng)過五次亞克隆篩選后，得到 2 株能夠穩(wěn)定分泌 DHAV-3瘤細(xì)胞株，分別命名為 4F3 和 2E11。圖 3-6 為顯微鏡下觀察到的以及亞克隆陽性單個(gè)細(xì)胞團(tuán)的狀態(tài)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3454922